论文部分内容阅读
长白山自然保护区生态系统较为完整,生物多样性水平较高,其中蕴藏着大量的真菌资源。长期以来人们主要通过传统的分离培养方法研究长白山自然保护区的真菌资源,具有一定的局限性。本论文利用分子生物学方法对长白山北坡土壤真菌的多样性进行研究,为长白山森林资源管理和微生物资源的开发利用提供依据。采用形态学鉴定法与基因序列分析法结合对长白山自然保护区北坡森林土壤真菌多样性进行研究。对采集的160份土壤样品进行了真菌的分离和培养,共得到菌株970株。通过形态学鉴定和分子鉴定结果的分析,共鉴定出真菌43属87种,包括子囊菌33属70种,接合菌9属16种,担子菌1属1种。采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术,研究长白山自然保护区北坡森林土壤真菌的多样性。通过对采集的32份土壤样品进行研究,结果表明,长白山自然保护区土壤真菌丰富程度较高。时间上,7月和8月土壤真菌较6月和9月丰富。通过DGGE图谱的聚类分析发现同一植被带下真菌组成相似,即真菌分布与植被带分布密切相关。采用分子克隆技术对长白山自然保护区北坡森林土壤真菌多样性进行研究。采用试剂盒法,直接提取土壤中总DNA,并对土壤真菌核糖体基因内转录间隔区进行PCR扩增,克隆和测序。通过同源性比对,将所得到的400个克隆划分成119个分类操作单元(OUT)。分析119个OUT,共鉴定出34属,82种真菌,其中担子菌16属55种,子囊菌17属22种,接合菌1属5种,还有一部分未分类真菌。红菇属(Russula)的分离频率最高占总数的10.25%,为长白山自然保护区北坡的最优势菌。采用高通量测序技术对80份土壤样品进行测序分析,发现长白山存在大量真菌资源,共获得优质序列229.4552万条。基于97%的相似度水平,共获得操作分类单元(OUT)25282个。通过物种分类分析发现,所获得的序列共包含5门24纲87目195科622属1056种。在属水平上,最为丰富的真菌是被孢霉属(Mortierella)。随着时间和海拔的不同,真菌的分布呈现规律性变化。