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植物液泡H+—ATPase(V—ATPase)是一类特殊的膜转运结合蛋白,广泛分布于植物的液泡膜等内膜系统上。它能水解ATP产生能量、调节pH值、产生跨膜质子电化学势梯度来驱动物质转运;同时,在植物处于逆境时还能通过自身调节使植物适应不良环境得以生存。
拟南芥V—ATPase由13个亚基组成,包括V0和V1两个结构域,c亚基是V0域的重要组成部分之一。现已明确c亚基由五个同源基因编码,研究发现c亚基对逆境的响应更为敏感。本论文获得了拟南芥4个VHA—c基因过表达转基因纯合体植物,并进行了初步分析,结果如下:
1.用半定量RT—PCR对4个基因的纯合转基因植物中目标基因的mRNA表达水平进行了检测,其中:7株VHA—c1纯合转基因植物中有2株mRNA表达水平较高的个体;6株VHA—c3纯合转基因植物中有2株mRNA表达水平较高的个体;9株VHA—c4纯合转基因植株中有7株mRNA表达水平较高的个体;7株VHA—c5纯合转基因植株中有6株mRNA表达水平较高的个体。
2.对过表达纯合体植株的表型分析发现:正常光照培养条件下,所有的VHA—c5过表达纯合体的根的长度变短;而VHA—c1,VHA—c3、VHA—c4过表达纯合体在暗培养5天后,6个VHA—c1株系、5个VHA—c3株系和所有VHA—c4株系的根的长度均短于对照。
3.ABA处理下:4个株系的VHA—c1和3个株系的VHA—c3过表达纯合体的相对根长均大于对照,且子叶的展开程度均高于对照;所有的VHA—c1株系和5个VHA—c3株系过表达纯合体的萌发率均大于对照。
4.在葡萄糖处理下:5个株系的VHA—c1和5个株系的VHA—c3过表达纯合体的萌发率均大于对照;在蔗糖处理下:4个株系的VHA—c1和所有株系的VHA—c3过表达纯合体的萌发率均大于对照。
以上结果表明,c1、c3、c4和c5亚基过表达可能在不同程度上影响了根细胞的扩展;且VHA—c1和VHA—c3基因的过表达导致转基因纯合体种子萌发和根伸长对ABA的抑制不敏感,并对葡萄糖和蔗糖对种子萌发的抑制不敏感,暗示V—ATPase可能参与了ABA和糖介导的信号转导途径。