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目的：肝纤维化（Hepatic fibrosis，HF）是指由于各种致病因子造成肝内纤维结缔组织异常增生，从而引起肝内弥漫性细胞外基质（Extra-cellular matrix，ECM）过度沉积的病理过程，是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段。因此，及时阻断及逆转肝纤维化是防止肝硬化发生、改善肝脏疾病预后的关键。多种细胞因子及信号转导途径参与肝纤维化发生发展过程，其中转化生长因子β（transforming growth factor beta, TGF-β）是一类能够调节细胞生长及细胞分化的多肽,是介导肝纤维化最关键的细胞因子，能够激活肝星状细胞（hepatic stellate cells, HSC），活化的HSC进一步转化为肌成纤维细胞，表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），合成并分泌ECM。TGF-β1/Smad信号传导途径是肝纤维化最重要的调控机制之一，对于肝纤维化的形成意义重大。目前已对肝纤维化的发生机制进行了大量研究，但阻断肝纤维化发生发展仍是需要攻克的难题。近年来中医理论研究及临床实践证明，中医药防治肝纤维化有独特的效果，其优势在于多靶点、多途径的整合治疗作用。化瘀通络中药鳖甲煎丸为东汉医家张仲景所创，载于《金匮要略·疟病脉证并治》，是治疗“疟母”的主方，具有活血化瘀、软坚散结、益气健脾的特点。鳖甲煎丸用于治疗肝纤维化、肝硬化，疗效确切，其成药广泛用于临床，疗效显著。本研究拟采用鳖甲煎丸作用于CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型，通过观察实验动物的一般情况，检测血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、血清白蛋白（ALB）的含量，测定Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、层粘连蛋白（LN）水平，观察肝脏病理学形态变化，检测肝组织TGF-β1及Smad3mRNA水平及各组大鼠肝组织α-SMA蛋白表达，探讨化瘀通络中药抗肝纤维化疗效及其可能作用机制。方法：健康清洁级雄性SD大鼠56只，体重360-410g，适应性饲养1周后，随机分为6组：正常组（A组）、模型组（B组）、秋水仙碱组（C组，０.1mg/（kg.d））、鳖甲煎丸低剂量组（D组，0.55g/（kg.d））、鳖甲煎丸中剂量组（E组，1.1g/（kg.d））、鳖甲煎丸高剂量组（F组，2.2g/（kg.d））。除正常组皮下注射橄榄油外,其它各组大鼠皮下注射40%CCl4橄榄油溶液,首次皮下注射5ml/kg体重,以后每周皮下注射2次,每次注射量均为3ml/kg体重，诱导大鼠肝纤维化模型。秋水仙碱组及鳖甲煎丸低、中、高剂量组在造模同时予以10ml/（kg.d）相应药液灌胃治疗,正常组和模型组同时给予等剂量的蒸馏水灌胃处理。于实验第6周造模成功后，停止CCl4或橄榄油皮下注射。秋水仙碱组、鳖甲煎丸低、中、高剂量组分别继续给予原剂量药液灌胃，正常组、模型组继续给予蒸馏水灌胃，每日一次，连续5周。于实验第11周末，大鼠禁食12h，应用水合氯醛麻醉，心脏穿刺取血，离心分离血清，测定各组大鼠血清ALT、AST、ALB水平,放射免疫法检测血清Col-Ⅳ、LN水平；取大鼠肝脏，留取肝左叶，置于4%多聚甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋，Masson染色及HE染色，光镜下观察肝组织的病理形态学变化，免疫组化方法检测肝组织中α-SMA蛋白表达；将肝右叶组织迅速置于液氮中，速冻后取出冻存于-80℃冰箱内保存，用于反转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerasechain reaction RT-PCR）法检测肝组织中TGF-β1及Smad3mRNA水平。结果：1大鼠一般情况正常组大鼠营养状况良好，体重自然增加，体态正常，反应灵敏，皮毛密集而有光泽。其他各组大鼠一般情况差，饮食少，毛发暗淡，体形消瘦，反应迟钝，脾气烦躁易激惹。在试验过程中，模型组死亡2只大鼠，秋水仙碱组、鳖甲煎丸低、中、高剂量组各死亡1只大鼠。2各实验组大鼠肝组织病理变化光镜下观察:正常组大鼠的肝小叶结构清晰完整,汇管区和中央静脉未见结缔组织增生，肝细胞多为单核，核仁清晰，未见脂肪变性和坏死，肝细胞呈条索状排列，向周围放射。模型组正常的肝小叶结构破坏或消失，肝组织广泛脂肪变性、坏死,呈空网状，汇管区扩大及炎性细胞浸润，纤维结缔组织增生明显，形成厚薄不一且相连接的纤维间隔，出现明显的肝纤维化。与模型组相比，鳖甲煎丸各剂量组及秋水仙碱组肝小叶破坏明显减轻，肝细胞脂肪变性坏死减少，炎性细胞浸润较少，可见纤维组织轻度增生，形成细薄的纤维束，假小叶形成明显减少。鳖甲煎丸高剂量组与中、低剂量组及秋水仙碱组相比肝纤维化程度明显减轻，秋水仙碱组与鳖甲煎丸低剂量组相比，肝脏病理改变差别不明显。3各实验组大鼠血清ALT、AST及ALB含量比较各组大鼠血清ALT、AST含量结果显示：与正常组相比，模型组、秋水仙碱组、鳖甲煎丸各剂量组明显升高（P<0.05）；与模型组相比，秋水仙碱组、鳖甲煎丸各剂量组明显降低（P<0.05）；与秋水仙碱组相比，鳖甲煎丸高剂量组较之明显减低（P<0.05），低剂量组较之升高（P<0.05），中剂量组与之差异无统计学意义（P＞0.05）；鳖甲煎丸各剂量组之间相比差异均有统计学意义（P<0.05）：高剂量组最低，低剂量组最高，中剂量组居中。各组大鼠血清ALB含量的结果显示：与正常组相比，模型组、秋水仙碱组、鳖甲煎丸各剂量组明显降低（P<0.05）；与模型组相比，秋水仙碱组、鳖甲煎丸中、高剂量组明显升高（P<0.05），低剂量组与之差异无统计学意义（P＞0.05）；与秋水仙碱组相比，鳖甲煎丸高剂量组较之明显升高（P<0.05），低剂量组较之明显降低（P<0.05），中剂量组与之相比差异无统计学意义（P＞0.05）；鳖甲煎丸各剂量组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）：高剂量组最高，低剂量组最低，中剂量组居中。4各实验组大鼠血清Col-Ⅳ、LN水平各组大鼠血清Col-Ⅳ水平显示：与正常组相比，模型组、秋水仙碱组、鳖甲煎丸各剂量组明显升高（P<0.05）；与模型组相比，秋水仙碱组、鳖甲煎丸中、高剂量组明显降低（P<0.05），低剂量组与之差异无统计学意义（P＞0.05）；与秋水仙碱组相比，鳖甲煎丸高剂量组较之明显降低（P<0.05），低剂量组较之明显升高（P<0.05），中剂量组与之相比差异无统计学意义（P＞0.05）；鳖甲煎丸各剂量组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）：高剂量组最低，低剂量组最高，中剂量组居中。各组大鼠血清LN水平显示：与正常组相比，模型组、秋水仙碱组、鳖甲煎丸各剂量组明显升高（P<0.05）；与模型组相比，秋水仙碱组、鳖甲煎丸各剂量组明显降低（P<0.05）；与秋水仙碱组相比，鳖甲煎丸高剂量组较之明显减低（P<0.05），低剂量组较之升高（P<0.05），中剂量组与之差异无统计学意义（P＞0.05）；鳖甲煎丸各剂量组之间相比差异均有统计学意义（P<0.05）：高剂量组最低，低剂量组最高，中剂量组居中。5各实验组大鼠肝脏组织TGF-β1及Smad3mRNA表达水平各组大鼠肝脏组织TGF-β1mRNA水平：与正常组相比，模型组、秋水仙碱及鳖甲煎丸各剂量组表达明显升高（P<0.05）；与模型组相比，秋水仙碱及鳖甲煎丸各剂量组降低（P<0.05）；与秋水仙碱组相比，鳖甲煎丸高剂量组较之降低（P<0.05），低剂量组较之升高（P<0.05），中剂量组与之差异无统计学意义（P＞0.05）；鳖甲煎丸各剂量组比较差异均有统计学意义（P<0.05）：高剂量组最低，低剂量组最高，中剂量组居中。各组大鼠肝脏组织Smad3mRNA水平：与正常组相比，模型组、秋水仙碱及鳖甲煎丸各剂量组表达明显升高（P<0.05）；与模型组相比，秋水仙碱及鳖甲煎丸各剂量组降低（P<0.05）；与秋水仙碱组相比，鳖甲煎丸高剂量组较之降低（P<0.05），低剂量组较之升高（P<0.05），中剂量组与之差异无统计学意义（P＞0.05）；鳖甲煎丸各剂量组比较差异均有统计学意义（P<0.05）：高剂量组最低，低剂量组最高，中剂量组居中。6各实验组大鼠肝组织α-SMA蛋白表达正常组大鼠肝组织中α-SMA只表达于小动脉及小静脉，在胆管无表达。模型组表达明显增多、增强，阳性染色程度增加，主要见于汇管区及纤维间隔，呈长椭圆形或梭形。其余秋水仙碱组、鳖甲煎丸各剂量组阳性染色程度较模型组明显减轻（P<0.05），纤维隔内间质细胞及炎性细胞阳性染色不同程度减轻，鳖甲煎丸高剂量组阳性染色明显低于剂量组、中剂量组及秋水仙碱组（P<0.05），秋水仙碱组与鳖甲煎丸中剂量组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：1肝纤维化大鼠存在肝功能损伤、肝内纤维结缔组织增生及细胞外基质过度沉积，化瘀通络中药可以明显改善肝功能，减轻肝组织纤维化程度。2化瘀通络中药可以明显下调肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1mRNA表达及Smad3mRNA表达，提示其抗肝纤维化作用可能与其调控TGF-β1/Smad3信号通路有关。3化瘀通络中药可以抑制肝纤维大鼠肝组织α-SMA蛋白表达，其抑制HSCs活化增殖可能为其抗肝纤维化的机制之一。