柿果实不同部分鞣质含量的测定及其水提取物对口腔致病菌体外抑菌活性的研究

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鞣质广泛存在于约70%的中草药的皮、干、根、叶或果实内,又可称为鞣酸或单宁(Tannin)。它具有的止血、止泻、收敛等多重种功效已被广泛利用到医疗及生活等方面。随着现代药理研究水平的提高,鞣质抗病毒、抑菌、抗氧化、保护黏膜、抗肿瘤等多方面的生理活性得到证实。随着对鞣质结构及化学成分的研究,其在口腔临床医学中也得到了广泛应用。柿子在我国的种植面积大且产量高,自古以来就是被人们视为药食两宜的食品,柿果实中含有丰富的糖、多酚及维生素等成分,具有显著的抗氧化、解毒、抑菌等活性。龋病和牙周疾病是口腔常见疾病,主要为细菌感染引起。近年来,局部使用抗生素治疗口腔疾病被广泛应用,但长期使用这些广谱抗生素打破了口腔正常菌群之间的相互制约,亦导致了耐药菌株的产生,破坏了口腔的健康微生态环境。天然植物对人体副作用小,与常用防龋、抗炎药物相比具有明显优势。因此通过实验研究柿鞣质水提物对口腔常见致病菌的抑制作用,对鞣质类化合物的口腔临床应用具有积极作用。目的:我国柿子资源丰富,柿中含有丰富的鞣质类物质,它具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、保护黏膜等多种生理活性。目前鞣质在口腔医学方面的研究已经逐步开展起来,其在口腔领域的实用性和安全性已得到多方面的认证。目前对柿鞣质纯化工艺及含量测定探讨较少,为了推动鞣质应用于口腔治疗的探索和研究,进一步优化柿鞣质纯化工艺,同时测定其各部分鞣质含量具有积极的作用。随着口腔预防医学的发展,安全有效、无毒副作用的口腔疾病预防与治疗已得到广泛重视。目前已被广泛应用的口腔局部防治药物还存在一些不足,有些药物易导致口腔菌群的失调。鞣质类化合物能有效地抑制细菌生长,并且安全无副作用,为口腔局部用药提供新的选择。方法:1柿果实鞣质的提取:分别对全柿果实、柿果肉、柿果皮进行超声提取,并对柿鞣质粗提取液进行脱糖,超滤,得到分子量为10000的柿鞣质溶液,利用Folin-Denis法测定提取液中鞣质含量,比较柿果实各部分鞣质含量差异。2全柿果实鞣质水提取物体外抑菌试验:实验菌株采用变形链球菌,血链球菌,白色念珠菌及大肠埃希氏菌,均为冻干粉保存。将实验菌株接种于哥伦比亚血琼脂培养基或脑心浸液琼脂培养基复苏。应用改良液体二倍稀释法在体外检测全柿果实鞣质水提取物对变形链球菌,血链球菌,白色念珠菌和大肠埃希氏菌的抑菌活性。另设立2支加有营养肉汤的试管和2支加有脑心浸液的试管分别作为阳性对照管以及阴性对照管。配置已通过比浊仪校正浓度的实验菌菌悬液,将配置好的实验菌菌悬液依次加入阳性对照管和实验药液试管中,每管菌最终浓度为5×104CFU/ml,37℃培养24h。再在无菌环境下依照原有培养基类型分别接种在营养琼脂培养基和脑心浸液琼脂培养基上,37℃培养48h。分别观测判读其最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)。结果:1鞣质对照品溶液在0.0016mg mL~0.0072mg mL范围内呈线性,其标准曲线回归方程y=39.913x+0.0141,相关系数R2=0.9984。其中每克全柿鞣质含量为396mg,每克柿果肉鞣质含量为297mg,每克柿果皮鞣质含量为59mg。2全柿果实鞣质水提取物对于变形链球菌的最小抑菌浓度为1:2;对于血链球菌的最小抑菌浓度为1:4;对于白色念珠菌的最小抑菌浓度为1:32;对于大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度为1:16。结论:1本实验采用超声提取方法分别提取柿果实各部份鞣质,通过比较可知柿果实不同部位鞣质含量:全柿果实>柿果肉>柿果皮。2全柿果实鞣质水提取物在体外对血链球菌、白色念珠菌和大肠埃希氏菌显示出了明显的抑菌活性,其中对白色念珠菌的抑菌作用最为明显;而对变形链球菌也表现出了一定的抑菌活性。
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