共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是亚油酸(LA)多种位置和几何异构体的统称,具有抗癌、降脂、增强免疫、抗动脉粥样硬化等重要的生理功能,其中,t10,c12-CLA是最具生理活性的异构体之一。目前工业上主要利用化学异构法生产共轭亚油酸,但产物是多种异构体的混合物,分离纯化困难、成本高。来源于痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)的亚油酸异构酶(PAI)能够将LA转化成单一的t10,c12-CLA。深黄被孢霉、高山被孢霉和拉曼被孢霉经发酵培养后菌丝体能积累大量的游离LA,因此这三株油脂真菌是亚油酸异构酶基因(pai)异源表达潜在的宿主菌株。本研究构建了 pai的异源表达载体,并尝试用农杆菌介导的转化方法将pai导入到三株油脂真菌的基因组上,进而获得能产t10,c12-CLA的工程菌株。本论文的主要研究结果如下:(1)观察了三株油脂真菌的菌落和菌丝形态,并通过气相色谱仪对其发酵培养后的菌丝体内油脂进行分析,结果显示三株菌都能大量积累游离LA。(2)通过敏感性试验没有找到可以作为深黄被孢霉筛选标记的抗生素,但是氯嘧磺隆(500 μg/ml)和潮霉素(500 μg/ml)能分别完全抑制高山被孢霉和拉曼被孢霉孢子的萌发,可以作为筛选两株真菌转化子的筛选标记。(3)以pFGL59为出发质粒,依次连接构巢曲霉启动子PgpdA和终止子Ttrpc,构建了 pLH51。然后将pai连接在启动子和终止子之间,构建了表达载体pLH55。将pFGL820-1上氯嘧磺隆抗性基因替换掉表达载体pLH55上的潮霉素抗性基因,构建了 pai的表达载体pLH107。(4)通过农杆菌介导的转化方法,将质粒pLH107上Ti区域导入到高山被孢霉基因组上。但是转化效率低,通过大量的筛选只获得一株阳性转化子。转化子经发酵培养后菌丝体内没有检测到目标产物t10,c12-CLA。(5)共培养结束后有68.75%的拉曼被孢霉转化子为稳定转化子。温度28℃、时间3 d、农杆菌和孢子比例2:1是拉曼被孢霉和农杆菌最优的共培养条件。转化子经发酵培养后菌丝体内能检测到目标产物t10,c12-CLA,证明pai在拉曼被孢霉中获得表达。