肝脏在内源性物质代谢及外源性物质代谢和清除毒素过程中起着重要作用。慢性肝脏炎症经常伴随一个共同病理改变是细胞外间质(extracellular matrix,ECM)的过度合成与异常沉积,即肝纤维化(hepatic fibrosis)。与此相对应的是,慢性刺激导致肝脏不断地再生,进而导致肝脏实质结构和血管构成(门脉系统和肝静脉系统)的紊乱,形成肝脏再生结节,即所谓的肝硬化。长期慢性肝损伤最终可引起肝硬化甚至肝衰竭或者肝癌的发生。肝损伤过程中伴随着Raf-1/MEK/ERK1,2信号通路的激活。Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)是一个在信号通路Raf-1/MEK/zERK1,2中起负向调节作用因子,也可以抑制NF-κB信号通路的活性。我们前期的研究证明,RKIP在肝脏纤维化组织表达下降,随着HSC的活化,RKIP的表达也明显降低,RKIP可以抑制HSC细胞增殖,但却促进其迁移。本课题组进一步研究证实RKIP还可以减少HSC在基质胶原的黏附。Locostatin是RKIP活性抑制剂,是一种无抗菌活性的黄恶唑酮衍生物。Lin X等通过用Locostatin干预肝纤维化模型证实肝纤维化后RKIP表达下降,香风草甙(Didymin)可通过上调RKIP表达缓解肝纤维化。而本课题组前期的研究初步证实Locostatin可以减少肝脏损伤,但是Locostatin对肝脏炎症的抑制作用认识不清楚。目的:本论文主要探讨Locostatin对四氯化碳小鼠肝脏炎症的影响及机制。方法:将30只小鼠随机分为正常对照组,四氯化碳模型组,Locostatin干预组。通过检测血清中谷氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、肝脏组织HE染色和MPO含量来判断肝脏炎症程度的变化,通过组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)及肝组织Masson染色研究胶原纤维的变化。运用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定T-SOD和MDA分析肝组织脂质过氧化情况。结果:1locostatin可以减轻肝脏病理组织炎症活动度正常对照组在干预1天后处死的5只小鼠其中4只可见肝脏组织结构正常,汇管区完整,无扩大,肝细胞排列整齐、大小均匀,肝索结构清晰,肝细胞索以中央静脉为中心向四周呈放射状排列,肝细胞无脂肪变性以及炎细胞浸润,但是有1只小鼠肝组织可见点灶状坏死。正常对照组在干预2天后处死的5只小鼠其中4只可见肝脏组织结构正常,肝细胞排列整齐、大小均匀,肝索结构清晰,肝细胞索以中央静脉为中心向四周呈放射状排列,肝细胞无脂肪变性以及炎细胞浸润,汇管区完整。四氯化碳模型组在干预1天后处死的小鼠汇管区扩大明显,有大量炎性细胞浸润,间隔周围界面炎明显,3带坏死并可见p-c桥接坏死。肝细胞脂肪变性、坏死很常见。四氯化碳模型组在干预2天后处死的小鼠较干预1天后处死的小鼠汇管区炎症稍微减轻,有大量炎性细胞浸润,间隔周围界面炎明显,偶见p-c桥接坏死。肝细胞脂肪变性很常见,并可见点灶状坏死。locostatin干预组小鼠相对于四氯化碳模型组小鼠炎症相对比较局限,间隔周围界面炎不太明显,偶见p-c桥接坏死,肝小叶结构相对清晰,肝细胞脂肪变性很常见,并可见点灶状坏死,locostatin干预组2天后处死的小鼠较1天后处死的小鼠肝脏炎症有所减轻。2locostatin可以减轻肝脏病理组织肝纤维化分期masson染色后可以较清晰地显示肝组织胶原纤维,肝实质细胞染色为红色,胶原染色为蓝色。正常对照组在干预1天后处死的5只小鼠和2天后处死的5只小鼠蓝色胶原纤维主要沉积在血管壁和汇管区。四氯化碳模型组在干预1天后处死的小鼠和干预2天后处死的小鼠肝脏组织胶原纤维沉积明显增多,汇管区扩大明显,纤维间隔形成并深入到肝小叶内,肝小叶结构不完整,肝窦可见较多蓝色纤维沉积。locostatin干预组在干预1天后处死的小鼠和干预2天后处死的小鼠汇管区有纤维结缔组织增生,扩大不明显,纤维沉积较模型组纤细,肝小叶结构较模型组相对清晰一些,肝窦偶见蓝色纤维沉积。3血清alt和ast指标的检测四氯化碳模型组在末次给药后2天后处死的血清alt含量和比四氯化碳模型组在末次给药后1天后处死的血清alt含量明显降低(163.53u/l±41.18u/lvs214.33u/l±0.85u/l,p<0.05,n=5)。locostatin干预组在末次给药后2天后处死的血清alt含量和比locostatin组在末次给药后1天后处死的血清alt含量也明显降低(163.53u/l±41.18u/lvs214.33u/l±0.85u/l,p<0.05,n=5)。正常对照组,四氯化碳模型组和locostatin干预组三组小鼠在末次给药1天后处死的血清ast含量分别为81.78u/l±9.52u/l,163.93u/l±32.94u/l,133.47u/l±4.28u/l。四氯化碳模型组小鼠血清ast含量均比正常对照组小鼠血清ast含量增高(p<0.01,n=5),locostatin干预组小鼠血清ast含量均比正常对照组小鼠血清ast含量增高(p<0.05,n=5)。正常对照组,四氯化碳模型组和locostatin干预组三组小鼠在末次给药后2天后处死的血清ast含量分别为65.70u/l±16.71u/l,119.90u/l±40.20u/l,100.72u/l±24.23u/l。四氯化碳模型组小鼠血清ast含量均比正常对照组小鼠血清ast含量增高(p<0.01,n=5),locostatin干预组小鼠血清ast含量均比正常对照组小鼠血清ast含量增高(p<0.05,n=5)。四氯化碳模型组在末次给药后2天后处死的血清ast含量和比四氯化碳模型组在末次给药后1天后处死的血清ast含量明显降低(119.90u/l±40.20u/lvs163.93u/l±32.94u/l,p<0.05,n=5)。4肝组织sod结果正常对照组,四氯化碳模型组和locostatin干预组三组均在在末次给药后2天后处死的小鼠肝组织t-sod含量比在末次给药后1天后处死的小鼠肝组织t-sod含量明显降低分别为(253.10u/mg±19.87u/mgvs276.06u/mg±17.61u/mg,p<0.05,n=5)、(237.36u/mg±28.35u/mgvs260.41u/mg±37.70u/mg,p<0.05,n=5)和(235.25u/mg±13.09u/mgvs268.21u/mg±25.92u/mg,p<0.01,n=5)。5肝组织mda结果四氯化碳模型组在末次给药后2天后处死的肝组织mda含量和比四氯化碳模型组在末次给药后1天后处死的肝组织mda含量明显降低(5.14μmol/g±1.18μmol/gvs6.15μmol/g±0.79μmol/g,p<0.05,n=5)。6肝组织MPO结果正常对照组,四氯化碳模型组和Locostatin干预组三组小鼠在末次给药后2天后处死的肝组织MPO含量分别为1.34U/g±0.12U/g,2.00U/g±0.88U/g,1.27U/g±0.16 U/g。其中四氯化碳模型组和正常对照组小鼠相比肝组织MPO含量明显增加(P<0.01,n=5),四氯化碳模型组小鼠在给予Locostatin干预后肝组织MPO含量明显降低(P<0.01,n=5)。四氯化碳模型组在末次给药后2天后处死的肝组织MPO含量和比四氯化碳模型组在末次给药后1天后处死的肝组织MPO含量明显升高(2.00U/g±0.88 U/g vs 1.64U/g±0.13 U/g,P<0.05,n=5)。7肝组织羟脯氨酸含量的结果正常对照组,四氯化碳模型组和Locostatin干预组三组小鼠在末次给药1天后处死的肝组织羟脯氨酸含量分别为202.15μg/g±7.29μg/g,254.65μg/g±25.52μg/g,231.43μg/g±15.45μg/g。其中四氯化碳模型组和正常对照组小鼠相比肝组织羟脯氨酸含量明显增加(P<0.01,n=5),四氯化碳模型组小鼠在给予Locostatin干预后肝组织羟脯氨酸含量明显降低(P<0.01,n=5)。但是四氯化碳模型组小鼠在给予Locostatin干预后肝组织羟脯氨酸含量仍然比正常对照组高(P<0.01,n=5)。正常对照组,四氯化碳模型组和Locostatin干预组三组小鼠在末次给药后2天后处死的肝组织羟脯氨酸含量分别为191.98μg/g±5.59μg/g,243.27μg/g±29.32μg/g,208.56μg/g±19.35μg/g。其中四氯化碳模型组和正常对照组小鼠相比肝组织羟脯氨酸含量明显增加(P<0.01,n=5)四氯化碳模型组小鼠在给予Locostatin干预后肝组织羟脯氨酸含量明显降低(P<0.01,n=5)。Locostatin组在末次给药后2天后处死的肝组织羟脯氨酸含量和比Locostatin组在末次给药后1天后处死的肝组织羟脯氨酸含量明显降低(208.56μg/g±19.35μg/g vs 231.43μg/g±15.45μg/g,P<0.05,n=5)。结论:Locostatin可以减少炎症细胞浸润,减轻四氯化碳引起的小鼠肝脏组织炎症,进而延缓缓解四氯化碳引起的小鼠肝组织纤维化。