基于适配体信号放大技术的沙门氏菌快速检测方法的研究

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:bobo82111
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
沙门氏菌是一类常见的肠杆菌科革兰氏阴性致病菌,它不仅危害人类健康,还会对畜牧业造成巨大的经济损失。沙门氏菌对人类健康的威胁主要表现为能引起伤寒和副伤寒,急性肠胃炎,菌血症和败血症等。对畜牧业的危害主要表现在可引起鸡,猪,牛等饲养的动物大面积患病甚至死亡。由于沙门氏菌能造成如此大的危害,如何实现对其进行快速有效的检测一直是相关领域的热点研究问题。适配体是利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)从核酸文库中经过若干轮体外筛选得到的能与靶标进行特异性结合的一段DNA或RNA序列。由于适配体具有靶标物质范围广,特异性及亲和力高,筛选周期短等诸多优点,使得其已在多个领域得到了应用。石墨烯是一种新发现的碳纳米材料,由于具有独特的二维平面结构、理想的理化性能,使其在医疗、机械、电子等高技术领域都有广阔的应用前景。杂交链式反应(HCR)是一个不需要酶参与就能扩增DNA的反应过程,HCR简便温和的反应条件使得其广泛应用于生物传感器的信号放大作用。本论文以肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的快速高效、高灵敏度、高特异性检测为研究目的,主要开展了以下工作:(1)设计了一种基于纳米材料氧化石墨烯和适配体探针对肠炎沙门氏菌进行检测的生物传感器。氧化石墨烯淬灭荧光和吸附单链核酸适配体,通过适配体与靶标的16S rRNA之间的特异性互补配对,将适配体探针拉离氧化石墨烯以恢复荧光信号。同时,适配体探针3’端的发卡结构双链末端在Klenow酶的作用下延伸将靶标序列置换下来,使靶标循环参与反应而放大信号,此外,同时使用FAM和SYBR Green I两种荧光染料产生协同效应使荧光信号进一步放大。通过以上双重荧光信号放大的共同作用,该传感器检测灵敏度得到极大提高,对靶标序列的检出下限为60pM,对实际样品中的肠炎沙门氏菌检出下限为102CFU·mL-1。除此之外,更改探针序列,该传感器还可以检测其他的靶标物质,具有很大的应用潜力。(2)利用杂交链式反应(HCR)放大信号,设计了一种使用适配体对鼠伤寒沙门氏菌进行快速、简便、特异性检测的方法,适配体与靶标特异性结合将暴露出引发序列从而起始HCR反应。杂交链式反应具有不需要酶参与,全程可以在等温条件下进行,反应条件温和等优点,简化了检测流程与设备需求。试验结果证明,该检测方法可快速完成对鼠伤寒沙门氏菌的检测,并可排除其他沙门氏菌属细菌的干扰,检测下限为103CFU·m L-1,检测范围为103-108CFU·mL-1。如果更换适配体序列,该检测方法可应用于对其他靶标的检测,具有较大应用价值。
其他文献
作为外语教学的重要组成部分,语法教学对学生的英语语法学习具有重要影响。然而,传统的高中英语语法课堂中一味以教师为主体的教学模式因容易造成学生被动灌输知识、学习热情消减、教学效果低下等不良问题而逐渐为人们所诟病。探索有效的高中英语语法课堂教学模式已经成为新时期人们推进语法教学改革的焦点之一。普通高中英语新课标强调,在教学方式上,语法教学应倡导从学生出发,构建自主、合作与探究课堂;在教学内容上,应联系
<正>近来,江苏省实施了关于中小学规范办学的"五严"要求。在"五严"背景下怎样才能做到"减负增效"?一段时间以来,我们进行了"预习导学"模式的英语教学尝试,发现"预习导学"模式
期刊
<正>我是一名年轻教师,对于教育事业,我充满热情。在担任班主任和少先队辅导员期间,我深刻感受到学生能在一个好的环境中学习、成长,对他们的身心健康发展,养成良好的生活和
项目成本管理是关乎施工企业生存发展的一个的重要管理问题。目前电力施工企业成本管理过程中存在的问题是:指标没有量化,成本核算不科学;人员素质不高,管理手段落后;成本管
为了分析行动者网络结构对网络内行动者合作关系建构的重要性,该文在三种网络结构熵模型的研究基础上,提出了一种点、边结合的行动者网络结构熵分析方法。通过定义行动者网络
目的:探讨腹腔镜下子宫肌瘤剔除术后出血的围手术期护理效果。方法:行子宫肌瘤切除术的患者80例随机分为治疗组和对照组各40例,两组患者都采用腹腔镜下子宫肌瘤剔除,然后对照
如何最大限度地发挥英文电影在大学英语课堂中的作用是大学英语教师不断探索和关注的问题。本文针对师范类大学生的英语口语学习动机,对部分电影对白选段进行互动策略分析;再
近年来,我国养老保险制度改革取得了很大成绩。但由于起步较晚,受基本国情国力的影响,无论在制度建设、税优政策,还是在保障水平等方面,还需要继续完善。$$第一,发展多层次养老保险
报纸
完善证人作证制度作为诉讼制度改革中的重要组成部分在党的十八届四中全会上明确提出。最高人民法院也首次将提高证人出庭率纳入今年年度工作报告中。然而从司法实践中的适用
目的:通过观察针灸对环磷酰胺(CTX)化疗小鼠骨髓细胞Notch信号通路中差异基因蛋白表达的影响,探讨针灸改善化疗后小鼠骨髓抑制的分子生物学机制。方法:选用雄性昆明种清洁小