VP基因表达载体构建及转化分析

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小麦(Triticum aestivum Linn)是我国重要的粮食,也是世界上起源最早和种植最广泛的谷类作物之一,其属于被子植物门单子叶植物纲禾本科。小麦的颖果含有淀粉、脂肪、蛋白质、多种维生素及酶类,具有极高的营养价值及药用价值。然而,干旱和土壤盐渍化使小麦大幅减产,阻碍了我国农业现代化进程。据统计,我国可用耕地面积的百分之十均有不同程度的盐渍化,另外我国还有四亿多亩的盐碱荒地和盐渍化土壤,占全国总耕地面积的百分之二十五。尤其是近几十年来,随着生态环境的恶化以及耕地的锐减,水资源的匮乏已成为农业生产的最大障碍。针对土地干旱、盐碱越来越严重并且小麦育种中优质的抗逆资源匮乏等情况,本试验利用分子生物学方法,根据拟南芥、水稻、大麦、玉米的H~+-PPase(H~+-pyrophosphatase)基因设计兼并引物,在抗逆小麦品种中进行扩增,得到小麦液泡膜H~+-PPase基因,从pCAMBIA 1380载体中设计引物得到CAMV 35S基因,从pEGFPN1中设计引物得到GFP基因,分别构建克隆载体后接着构建表达载体,酶切鉴定正确后将最终构建好的pCAMBIA 1380-35S-TVP-GFP载体通过农杆菌转化法转入拟南芥,并筛出纯合株系,接着进行萌发试验与绿苗率统计测定、幼苗脯氨酸含量测定、成苗脯氨酸含量测定、成苗电导率的测定等对拟南芥进行耐盐、抗旱功能分析。我们的研究证明该基因能够帮助植物提高抗盐及抗旱能力,从而为培育优质的小麦抗逆新品系奠定基础。
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