牛病毒性腹泻/粘膜病ELISA方法的建立及血清学调查

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牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为黄病毒科,瘟病毒属成员,是一种在世界范围内对造成家畜健康严重危害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛病毒性腹泻病毒与猪瘟病毒和羊边界病毒在血清学上有交叉反应。目前为止,还没有有效的预防和控制BVDV的措施。建立高效快速的检测方法,对于该病的早发现、早防制具有重要作用。本研究以纯化的BVDV为包被抗原,建立了检测BVD血清抗体的间接ELISA检测方法。经优化选择,确定了ELISA最佳工作条件:包被液为磷酸盐缓冲溶液,4℃包被过夜;包被抗原稀释度为1:200,4℃孵育过夜;封闭液为5%脱脂奶粉,37℃封闭2h;被检血清稀释度为1:100,37℃孵育1h;HRP标记兔抗牛IgG稀释度为1:10000,37℃孵育30min,阴阳性界限值为0.320。试验结果表明,建立的牛病毒性腹泻病血清抗体ELISA检测方法具有特异性高、灵敏性好、变异性小的优点,与国外试剂盒相比符合率为91.3%。总之,本研究建立的牛病毒性腹泻病抗体ELISA检测方法,为新疆地区牛病毒性腹泻的监控奠定了基础。
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