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隐孢子虫（Cryptosporidium）是引起人和动物腹泻的重要病原之一，其主要感染宿主小肠上皮细胞。通过比较基因组学分析发现，隐孢子虫特异性MEDLE家族蛋白和胰岛素降解酶家族蛋白可能与隐孢子虫宿主适应性相关，且前期关于微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）中MEDLE家族蛋白成员CpMEDLE-2（cgd5_4590基因编码）的初步表征表明，MEDLE家族蛋白可能与隐孢子虫入侵宿主细胞的过程相关。然而，MEDLE家族其他成员以及胰岛素降解酶家族蛋白在隐孢子虫入侵中的功能仍有待进一步研究。 本研究选取另一MEDLE家族成员CpMEDLE-1（cgd5_4580基因编码）进行基因克隆、蛋白表达和功能分析。实验通过构建重组质粒，转化至E.coliBL21(DE3)中进行原核表达获得目的蛋白，然后以纯化后的目的蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。通过实时荧光定量PCR测定目的基因在C.parvum体外培养过程中的表达情况，通过间接免疫荧光法定位目的蛋白在C.parvum生活史阶段的表达位置，通过抗体体外中和试验检测目的蛋白在C.parvum入侵过程中是否发挥作用。结果表明，cgd5_4580基因在侵染后2h表达量达到最高峰。CpMEDLE-1主要在子孢子的中前端区域表达，可能位于致密颗粒内部，其多克隆抗体的中和效率约为40％。上述结果说明，CpMED LE-1可能与C.parvum入侵宿主细胞的早期过程相关，并在其中发挥重要作用。比较CpMEDLE-2的相关数据表明，MEDLE家族成员的表达位置不同，其表达情况可能受隐孢子虫发育调控，且可能在隐孢子虫的不同生长阶段发挥作用。另一方面，对胰岛素降解酶家族成员INS-16（cgd3_4270基因编码）进行了体外表达尝试，结果不理想，目的蛋白表达量偏低，且存在多条带现象，仍需后期实验进一步优化表达体系。 以上结果为了解隐孢子虫特异性MEDLE和胰岛素降解酶家族蛋白的生物学功能和分子机制奠定基础，有利于进一步阐明隐孢子虫的入侵机制，从而为制定新的免疫治疗策略提供理论依据。