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目的:β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8)是本实验室通过电子克隆得到的一个新型的人类糖基转移酶,通过同源序列比对确定其属于β3糖基转移酶大家族。有学者报道,β3GnT2和β3GnT8能够在体外形成异二聚体,此复合物的催化活性比两者各自的酶活性显著增强,另外研究表明,转录因子Ets-1可以调节一些糖基转移酶的表达,本文旨在通过研究四种白血病细胞株β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8以及转录因子Ets-I在ATRA、TPA诱导分化后的表达变化,进而探讨它们在白血病中功能相关性。
方法:1.采用RT-PCR及实时定量PCR方法从mRNA水平上研究β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8及转录因子Ets-1的表达变化;2.染色质免疫沉淀(CHIP)的方法检测转录因子Ets-1对β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8基因的表达调控;3.免疫荧光检测β3GnT2、β3GnT8与转录因子Ets-1在白血病细胞株K562中的定位表达。
结果:1.与对照组比较,四种细胞株在经过ATRA、TPA诱导分化后,β3GnT2、βGnT4、β3GnT8和Ets-1的表达量均有提高,β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化趋势一致,且Ets-1的表达变化规律和β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化规律一致;2.从ChIP产物中进行目的基因的扩增,扩增后发现在K562细胞株的ChIP产物中均可扩增出β3GnT2和β3GnT8基因,而未扩增出β3GnT4基因;3.免疫荧光检测发现,β3GnT2和β3GnT8在核周和胞浆都有表达,转录因子Ets-1只在核上和核周有表达,CY3标记的红色荧光与FITC标记的绿色荧光有重叠,重叠部分呈黄色荧光。
结论:与对照组相比,加药后β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化趋势一致,且Ets-1的表达变化规律和β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化规律一致。染色质免疫沉淀以及免疫荧光检测,证实转录因子Ets-1可与糖基转移酶β3GnT2、β3GnT8结合。因此,转录因子Ets-1可能参与介导β3GnT2与β3GnT8基因的表达调控,是上调β3GnT2与β3GnT8基因表达的转录因子。