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实验目的用本实验室配制含自体骨髓间充质干细胞(MSCs)的羊膜载体复合膜(羊膜-明胶-壳聚糖膜)植入皮肤全层缺损处．同时向该植入微环境内添加缓释的bFGF和vitC等有利于修复的因素，从而在整个真皮修复过程中加深对表皮新生和重建速度的影响，探讨真皮修复过程中对表皮的修复和重建是否有影响以及是否有促进表皮修复速度的最佳阶段。实验材料与方法抽取24只新西兰大耳白兔的骨髓间充质干细胞，经体外分离、培养、扩增、传代并纯化骨髓间充质干细胞。将分离、纯化出的第二代骨髓间充质干细胞以一定的密度接种于羊膜载体复合膜上，制成组织工程皮肤替代物。在每只兔的背侧即脊柱两侧做三个创面，去除表真皮以及皮下组织，深度直达深筋膜，面积约为3.14cm~2，随机分为A组B组和C组。将各组织工程皮肤替代物分别移植到三组创面上。A组创面即试验组：为骨髓间充质干细胞+牛羊膜-明胶-壳聚糖复合膜+bFGF和VitC。B组创面：为骨髓间充质干细胞+牛羊膜-明胶-壳聚糖复合膜．C组创面：仅单纯为牛羊膜-明胶-壳聚糖复合膜。分别在植入术后7天、14天、21天这三个时间点取材观察结果。用图像分析仪法测算出各组各时间点的创面平均愈合面积(cm2)并计算出愈合率、采用大体观察、常规组织学观察(HE染色、Masson染色、Van Giesonr染色)、Ⅰ型胶原免疫组织化学观察、电镜观察、墨汁灌注法等化学染色动态观察创而愈合情况。实验结果①A组在7天、14天、21天各时间点的新生真皮明显较B组相应时间点的厚、活跃的Ⅰ型胶原阳性细胞数多、电镜下粗面内质网扩张的成纤维细胞、血管和胶原纤维均较B组的多．在同等条件下比较在7天、14天、21天各时间点B组比C组的修复效果好。②A组术后14天和21天新生真皮表面，从其周边正常有毛的皮肤中，表皮再生长入并覆盖真皮修复创面的速度均比B组的快，在同等条件下比较B组的表皮覆盖速度又比C组的快。尤其是在术后21天A组新生真皮全被新生表皮覆盖，而且表皮几乎均变为复层，但是B组不但表皮覆盖的面积少于A组而且覆盖真皮修复创面的表皮细胞层次均少于A组。③应用图像分析仪技术测得真皮修复创面的真皮厚度、表皮厚度、血管数量、成纤维细胞数量、愈合的创面面积并计算出创面愈合率。对这些数据进行统计学处理，通过方差分析得出，在真皮厚度、表皮厚度、血管数量、成纤维细胞数量、创面愈合率的比较中，A组B组和C组这三组有差异，A组比B组好，B组比C组好，差异有统计学意义。结论体外培养的组织工程皮肤替代物植入全层皮肤缺损后，并向该缺损微环境内添加MSC和缓释的bFGF和vitC等有利于皮肤修复的因素，能加速真皮的修复和重建。并且在真皮修复过程中有可能有表皮新生和重建的最佳时期。