miR-3154靶向PTEN促进卵巢癌细胞增殖和转移

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目的卵巢癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一。Micro RNAs(miRNAs)已被发现在卵巢癌的进展中起重要作用,但miR-3154在卵巢癌中的潜在作用尚不清楚。本研究旨在探讨miR-3154在卵巢癌增殖和转移中的作用。方法收集临床组织样本:30例卵巢癌组织及邻近正常组织;15例转移灶及配对的原发性卵巢癌组织、15例复发性卵巢癌组织及配对的原发性卵巢癌组织。将人卵巢癌细胞系HO8910和A2780在含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素溶液的RPMI-1640培养基中培养,37℃,5%CO2。用0.5%胰蛋白酶分离HO8910和A2780细胞,接种于6孔板中。miR-3154基因敲除病毒感染HO8910和A2780细胞。通过实时荧光PCR检测基因敲除效应。miR-3154海绵病毒和miR-3154模拟病毒分别感染HO8910和A2780细胞及其对照。用si-PTEN和对照si RNA感染HO8910和A2780细胞。然后用嘌呤霉素筛选稳定的感染物。用CCK-8比色法检测细胞的生长情况。HO8910 miR-3154海绵和A2780 miR-3154海绵及其对照细胞的集落形成实验和EDU免疫荧光染色法检测细胞增殖情况。细胞划痕实验显示细胞迁移能力。通过Transwell和Matrigel侵袭小室实验进一步检测miR-3154基因敲除对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。将HO8910 miR-3154海绵细胞或对照细胞接种于裸鼠皮下进行异种移植实验。显示各组肿瘤生长曲线和平均重量。利用si RNA转染,将miR-3154海绵、miR-3154模拟或miR-3154对照和含有特定序列的野生型或突变型PTEN片段的p MIR报告荧光素酶载体共转染卵巢癌细胞,进行荧光素酶报告基因检测。实时定量PCR分析、Western blot分析、免疫组化检测PTEN在HO8910 miR-3154海绵和A2780 miR-3154海绵及其对照细胞中的表达,以及检测PTEN HO8910 miR-3154模拟细胞和A2780miR-3154模拟细胞及其对照细胞中的表达。通过对Target Scan和miRBase数据库的生物信息学分析,研究miR-3154下游靶点。实时定量PCR和Western blot分析检测卵巢癌细胞PTEN m RNA和蛋白的表达。结果在卵巢癌组织中,miR-3154的表达明显上调。miR-3154能有效促进卵巢癌细胞增殖和转移。双荧光素酶报告实验结果表明,PTEN是miR-3154在卵巢癌细胞中的直接靶蛋白。人卵巢癌组织中miR-3154的表达与PTEN的表达呈负相关。si-PTEN部分缩小了miR-3154基因敲除的卵巢癌细胞与对照细胞生长和转移能力的差异。结论miR-3154通过直接靶向PTEN促进卵巢癌的增殖和转移,下调miR-3154的表达可能成为卵巢癌未来的一种新的治疗策略。
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