【摘 要】
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目的研究RNA结合蛋白KHDRBS3（KH domain containing,RNA binding,signal transduction associated 3）对胃癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响和可能的作用机制,为研究KHDRBS3对胃癌细胞的调控机制奠定实验基础,以期为胃癌的临床早期诊断以及后续治疗提供实验依据。方法1、细胞株的培养:体外培养胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823,
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目的研究RNA结合蛋白KHDRBS3（KH domain containing,RNA binding,signal transduction associated 3）对胃癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响和可能的作用机制,为研究KHDRBS3对胃癌细胞的调控机制奠定实验基础,以期为胃癌的临床早期诊断以及后续治疗提供实验依据。方法1、细胞株的培养:体外培养胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823,蛋白质印迹实验（Western Blotting）检测KHDRBS3在两种细胞中的表达情况。选择KHDRBS3本体表达高的细胞株进行后面的下调实验,选择KHDRBS3本体表达低的细胞株进行后面的过表达实验。2、基因转染:过表达实验分为空白组、pcDNA3.1空载体转染组和pcDNA3.1-myc-KHDRBS3转染组（过表达组）;siRNA敲低实验分为空白组、control siRNA转染组和KHDRBS3 siRNA转染组（下调组）。通过转染试剂Lipofectamine2000分别将pcDNA3.1空载体和pcDNA3.1-myc-KHDRBS3质粒转入胃癌细胞株SGC-7901中,将control siRNA和KHDRBS3 siRNA转入胃癌细胞株BGC-823中。3、MTT实验分别检测过表达KHDRBS3对胃癌细胞株SGC-7901及下调KHDRBS3对胃癌细胞株BGC-823增殖能力的影响。4、细胞划痕实验分别检测过表达KHDRBS3对胃癌细胞株SGC-7901及下调KHDRBS3对胃癌细胞株BGC-823迁移能力的影响。5、Transwell实验分别检测过表达KHDRBS3对胃癌细胞株SGC-7901以及下调KHDRBS3对胃癌细胞株BGC-823侵袭（铺胶）和迁移（不铺胶）能力的影响。6、Western Blotting检测过表达KHDRBS3对胃癌细胞株SGC-7901及下调KHDRBS3对胃癌细胞株BGC-823的CCNB1、CDK1-Y15、CDK1-T14、上皮型钙粘蛋白（E-cadherin）、转录调节因子（Snail、Twist）、神经型钙粘蛋白（N-cadherin）等蛋白表达的影响。结果1、KHDRBS3在胃癌细胞株BGC-823中KHDRBS3表达较高（P<0.01）,而在胃癌细胞株SGC-7901中表达较低（P<0.01）。后面KHDRBS3过表达部分的实验在胃癌细胞SGC-7901株中进行,下调部分选择在胃癌细胞株BGC-823株中进行。2、MTT实验结果表明过表达KHDRBS3抑制胃癌细胞株SGC-7901的增殖（P<0.01）,下调KHDRBS3促进胃癌细胞株BGC-823细胞的增殖（P<0.01）。3、细胞划痕实验结果表明过表达KHDRBS3后胃癌细胞株SGC-7901的划痕面积变化较小,抑制了细胞的迁移（P<0.01）。下调KHDRBS3后,胃癌细胞株BGC-823细胞划痕面积明显变小,促进细胞的迁移（P<0.01）。4、Transwell实验结果表明过表达KHDRBS3后,胃癌细胞株SGC-7901侵袭数目减少（P<0.01）。下调KHDRBS3后,胃癌细胞株BGC-823侵袭数目增多（P<0.01）。Transwell不铺胶实验中过表达KHDRBS3后,胃癌细胞株SGC-7901迁移数目减少（P<0.01）。下调KHDRBS3后,胃癌细胞株BGC-823迁移数目增多（P<0.01）。5、Western Blotting结果表明,过表达KHDRBS3后,E-cadherin蛋白的表达增加,Snail、Twist、N-cadherin、CCNB1、CDK1-T14和CDK1-Y15蛋白的表达减少（P<0.01）;下调KHDRBS3后,E-cadherin蛋白的表达减少,Snail、Twist、N-cadherin、CCNB1、CDK1-T14和CDK1-Y15蛋白的表达增加（P<0.01）。结论过表达KHDRBS3能够抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力;敲减KHDRBS3能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。KHDRBS3通过调节胃癌细胞中M期促进因子（M-phase promoting factor,MPF）信号通路介导胃癌细胞上皮间质转化（epithelial–mesenchymal transition,EMT）,从而调节胃癌细胞的侵袭及迁移能力,为胃癌的细胞生物学机制提供实验依据。
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