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目的: 胰腺癌尤其是胰腺导管腺癌,早期诊断困难,恶性程度极高,预后极差,是目前癌症死亡的第四大原因。2015年我国新发胰腺癌103428例,其中超过85%的胰腺癌起源于导管细胞,约80%的胰腺癌发生在胰头部。多数有症状的患者确诊时已处于晚期,不可切除的进展期胰腺癌患者5年死亡率几乎100%。胰腺癌发生发展的机制及治疗靶点的研究需求迫切。 胰腺癌的发生和发展是一个多阶段、多因素、多基因参与的复杂的过程。慢性炎症微环境被认为是胰腺癌发生最重要的危险因素。炎性相关因子白介素6(IL-6)、Pim-1等在胰腺癌的生成、增殖和分化过程中起重要作用。这些炎症与肿瘤相关蛋白的表达受到RNA结合蛋白的调控。RNA结合蛋白通过结合于许多转录因子3-UTR区富AU序列元件进而调节mRNA的稳定性,有可能成为胰腺癌治疗中潜在的治疗靶点。 Tristetraprolin(TTP)属于RNA结合蛋白,可识别mRNA中ARE序列(AU richelement),从而引起mRNA降解。TTP功能抑制是Myc参与的恶性肿瘤形成的重要机制。IL-6和Pim-1转录子均包含ARE序列这一TTP的结合位点。提示TTP可能在肿瘤的发生发展过程中起到抑癌基因的作用。TTP失活可能会促进肿瘤的发生发展。但TTP在胰腺癌中的表达情况及功能目前仍不清楚。因此,本研究对TTP在胰腺癌中的表达情况及作用进行了研究和探讨。 实验方法: 免疫组化检测90例胰腺癌及配对癌旁组织TTP蛋白表达水平。分析TTP蛋白表达与胰腺癌临床病理参数之间的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析。qRT-PCR及western blot分别检测35对胰腺癌和配对癌旁组织TTP mRNA及蛋白表达水平。构建TTP过表达细胞株。采用CCK-8、FACS检测TTP过表达对胰腺癌细胞生长、增殖及凋亡的影响。通过裸鼠皮下成瘤实验检测TTP过表达对体内肿瘤生长的影响。RNA-seq分析胰腺癌细胞中受TTP调控的候选基因。进一步通过qRT-PCR及western blot验证胰腺癌细胞中操控TTP表达后Pim-1和IL-6的表达变化。 结果: qRT-PCR方法检测了35例胰腺癌患者癌组织与配对癌旁组织中TTP mRNA的表达情况,发现27例出现mRNA表达下调,占77.1%(P<0.05)。采用western blot在蛋白水平检测TTP蛋白的表达水平,发现胰腺癌组织中TTP蛋白的表达也低于配对的癌旁组织。对90例胰腺癌患者组织芯片进行免疫组化染色,TTP蛋白主要定位于胞质,71(78.9%)例胰腺癌组织中的TTP表达强度低于其配对的癌旁组织(P<0.01)。TTP低表达与肿瘤的差分化相关(P=0.004)。TTP低表达与年龄(P=0.037),肿瘤大小(P=0.008),病理T分期(P<0.001),病理淋巴结分期(P=0.008)和TNM分期(P<0.001)具有相关性;与性别、肿瘤位置无关。 对90例胰腺癌患者的TTP表达与总生存的关系进行Kaplan-Meier生存分析。所有患者中位生存时间为20个月,高表达TTP的病例中位生存期可达67个月,远高于TTP低表达病例的13个月的中位生存期(P<0.05)。单变量分析显示,TTP的表达情况,肿瘤分化,TNM分期,病理T分期,病理N分期,肿瘤大小是影响胰腺癌患者术后生存率的因素。 CCK-8检测提示,TTP过表达抑制PanC-1和AsPC-1细胞生长。TTP过表达抑制PanC-1和AsPC-1细胞的克隆形成。TTP过表达抑制PanC-1异种移植裸鼠的成瘤。流式细胞术对TTP过表达PanC-1细胞及其对照进行分析,发现TTP过表达细胞凋亡比率升高,BrdU阳性比率降低。 应用RNA-seq分析TTP过表达PanC-1和AsPC-1细胞及对照细胞转录组的差异表达,鉴定出与TTP可能相互作用的候选基因。qRT-PCR和western blot检测验证Pim-1和IL-6在mRNA及蛋白水平受TTP的调控。 结论: 本研究发现TTP在胰腺癌组织中呈低表达。并且其低表达和肿瘤分化,年龄,肿瘤大小,病理T分期,病理淋巴结分期和TNM分期具有相关性。TTP的表达情况是影响胰腺癌患者术后生存的因素。过表达TTP可抑制胰腺癌生长、增殖,促进凋亡。胰腺癌细胞中TTP对Pim-1和IL-6的表达具有调控作用。TTP有可能作为胰腺癌治疗靶点和预后预测指标。