三拗汤干预小鼠哮喘效应及成分分析研究

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目的:1、研究三拗汤及其单味药组合配伍前后干预哮喘的效应变化;2、研究三拗汤及其单味药组合配伍前后在血浆中成分的含量变化;3研究三拗汤及其单味药组合配伍前后效应与成分含量的内在关系,试评价三拗汤配伍意义。方法:三拗汤根据《局方》剂量整理设计为麻黄:杏仁:甘草=1:1:1。通过实验方法分别水煎提取三拗汤液、麻黄-杏仁-甘草混合液、麻黄单煎液、杏仁单煎液、甘草单煎液供试备用。1.血药成分研究。选择高效液相-质谱联用仪(UPLC-MS)进行血药成分检测。选择盐酸麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、芒柄花素、苦杏仁苷、野黑樱苷、甘草次酸、甘草苷进行相关实验方法处理得到标准品溶液,进行液相条件摸索以及测定相关标准曲线。再将三拗汤合煎组、麻黄-杏仁-甘草混合液组、麻黄组、杏仁组、甘草组给予大鼠灌胃,连续三天,采集血浆进行纯化处理,通过相同实验方法得到备测供试品溶液同时进行含量测定,得到相关图谱及定量分析结果,进行数据分析和结果评价。2.效应研究。选择三拗汤合煎组、麻黄-杏仁-甘草混合液组进行实验验证。复制OVA哮喘小鼠模型,对哮喘气道炎症进行评价,对呼吸间歇值气道高反应性进行数据采集处理,并对小鼠肺部病理切片进行观察评价,探讨三拗汤的不同组别对小鼠哮喘效应的影响给予客观的评价。结果:干预哮喘效应结果显示:与模型组比较,三拗汤及麻黄-杏仁-甘草混合液都可以降低血液中嗜酸性粒细胞(EOS)的水平(P<0.05),改善肺功能,改善哮喘小鼠肺病理模型情况。血药成分含测结果显示:麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、甘草次酸、甘草苷、芒柄花素、杏仁苷7种成分分离较好,成分具有特异性易于鉴别。麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱,以三拗汤组血药含量最高,麻黄-杏仁-甘草混合液组与麻黄单煎液组血药含量基本相同;甘草次酸、甘草苷、芒柄花素以三拗汤组含量最高,混合液组含量略高于甘草单煎液组。结论:1、三拗汤方义认为麻黄辛温,发汗解表、宣肺平喘;杏仁苦平,肃肺降气、化痰通便;甘草甘平,根肾稍降、生中有补、清热祛痰、运脾和中、调和药性;三者在药性配伍、升降学、炮制学等配伍应用方面具有特殊意义。2、实验研究证明:三拗汤合煎干预哮喘效应效果最优、血药各成分含量最大;麻黄-杏仁-甘草混合液具有一定干预哮喘作用,血药含量较低,甘草成分略高于其甘草单煎液的血药含量水平。有效成分越高,干预哮喘作用越强。3、甘草配伍可能具有生物调节作用,有利于提高药物之间的生物利用度,延缓自身或药物间的代谢时间,提高药效。4、三拗汤在干预哮喘过程中,麻黄、杏仁、甘草三者不可分割,具有整体优效的干预哮喘效应作用,且合煎后血中的成分含量最高,是镇咳平喘,解毒抗炎作用强的主要原因,反应了中医配伍理论的正确性。
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