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本研究从仿生结构思想出发,利用聚苯乙烯制备微孔拓扑结构表面,同时引入壳聚糖和半乳糖对温敏性N-异丙基丙烯酰胺凝胶进行改性,制备肝组织工程研究用温度响应性凝胶支架材料,研究了其对细胞行为的影响。
利用溶剂-非溶剂(SNS)相分离法,成功制备了不同尺寸的连通性微孔结构聚苯乙烯(PS)板表面。并进行了人正常肝细胞系(HL-7702)培养,结果表明孔洞尺寸在亚细胞尺寸(~10μm)范围内时,更有利于细胞增殖。另外,H&E染色(hematoxylin-eosin staining)和微核实验结果表明,微孔结构为亚细胞尺寸时,细胞在其表面生长时细胞与细胞之间的粘连性更好,材料表面对细胞的毒性比其他两种表面毒性更小。
N-异丙基丙烯酰胺虽然具有良好的温度响应性,能够制备具有温度响应性细胞支架材料,但其生物相容性欠佳。本文在NIPAAm凝胶中引入半乳糖(GAC),制备了温敏性水凝胶P(NIPAAm-co-GAC)。通过在其表面种植HL-7702细胞,探索了细胞在其表面的增殖、细胞功能的保持以及细胞片层的脱附行为。结果表明,细胞在P(NIPAAm-co-GAC)(R=0.2)凝胶表面黏附和增殖最好,细胞的白蛋白和尿素合成功能完好的保持;细胞片层可以从P(NIPAAm-co-GAC)(R=0.2)凝胶表面自发脱附;H&E染色和细胞周期检测结果显示,从P(NIPAAm-co-GAC)(R=0.2)凝胶表面脱附的细胞比用酶消化脱附的细胞形态更完整,细胞的活性指数更高。过量的GAC单体含量会导致脱附细胞的凋亡。
半乳糖具有阴离子性,能诱导细胞凋亡,壳聚糖虽然虽然带有阳离子基团但是其不具有肝细胞特异性结合位点,单独引入到NIPAAm水凝胶中用于肝组织工程均存在一定的不足。本文成功制备了温敏性半乳糖基化壳聚糖N-异丙基丙烯酰胺共聚水凝胶(Gal-CS-g-PNIPAAm)。对其成分、结构以及温度响应性进行了表征研究。利用浸提液检测法对凝胶的毒性进行了检测,结果显示凝胶对L929和HL-7702细胞无毒性。在Gal-CS-g-PNIPAAm凝胶表面培养HL-7702细胞,研究其生长、脱附及转载(再增殖)行为。结果表明Gal-CS-g-PNIPAAm水凝胶具有良好的温度响应性和生物相容性,与PNIPAAm水凝胶相比,Gal-CS-g-PNIPAAm凝胶表面更有利于HL-7702细胞增殖。将温度降低至临界温度(LCST,32.5℃)以下,细胞可以从凝胶表面自发脱附,与酶消化脱附相比,细胞损伤更少。Gal-CS-g-PNIPAAm凝胶表面脱附的细胞比PNIPAAm凝胶表面脱附的细胞活性更高,表明PNIPAAm水凝胶引入GC单体后,凝胶的生物相容性得到改善,且脱附后细胞的增殖活力明显增加。