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白血病是一类常见的严重威胁人类健康的造血系统恶性肿瘤。目前,化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要手段,但是,通过化疗只能取得短暂缓解,而异基因造血干细胞移植治疗白血病5年无病生存率仅为35%—50%。此外,因造血干细胞供体限制,只有部分患者能进行这一治疗,而且还存在移植相关死亡和复发危险性。因此,寻找新的更有效抗白血病药物仍然十分迫切和需要。氯原酸是一种提取自中草药的物质,具有广泛的生物学效应,氯原酸钠是一种氯原酸和钠盐的半合成小分子化合物,近期有研究显示氯原酸可以诱导包括Bcr-Abl阳性的慢性粒细胞白血病(CML)原代细胞在内的Bcr-Abl阳性细胞的凋亡,而对Bcr-Abl阴性的细胞无明显作用。另外,我们前期的研究工作已经证实,钙离子通道阻止剂小檗胺能选择性诱导Bcr-Abl阳性的人白血病细胞系K562和原代白血病细胞凋亡,而对正常骨髓造血细胞毒性很少。基于此,我们采用人白血病细胞系KG1、K562和Jurkat,以适当浓度的氯原酸作用于各细胞系,观察氯原酸对各株白血病细胞的增殖抑制作用。并将氯原酸和小檗胺联合作用于K562细胞,比较药物联合作用和各自单独作用对细胞的增殖抑制作用。对象与方法一、研究对象人白血病细胞系:KG1、K562和Jurkat三株细胞系,其中KG1为急性原始粒细胞白血病细胞系,K562为慢性粒细胞白血病细胞系,Jurkat为急性淋巴细胞白血病细胞系(ALL)。均为本实验室常规培养。二、研究方法1.细胞接种:采用处于对数生长期的细胞,按细胞密度8×103/孔分别加入96孔细胞培养板中。2.药物作用:每孔分别加入梯度浓度的药物,Na-氯原酸和(或)小檗胺,不加药物为阴性对照,每组设3个平行孔。37℃,5%CO2,饱和湿度下培养48小时。3.MTT作用:每孔加入20μlMTT,继续培养4小时。4.测吸光度:离心,弃上清,每孔加入200μl二甲基亚枫,水平摇床振荡5分钟,用全自动酶标光度计在470nm处测吸光度。5.在计算机中使用Microsoft Office Excel计算抑制率及50%细胞生长抑制浓度,并以药物浓度为横坐标,活细胞数为纵坐标作图,观察药物对细胞增殖抑制的情况。结果-20℃保存的不同浓度的氯原酸钠对K562细胞有明显的增殖抑制作用,其作用强度呈现浓度依赖性,48小时的50%细胞生长抑制浓度(IC50)值为24.210μg/ml,但是对KG1、Jurkat均无明显得增殖抑制作用。4℃保存的不同浓度的氯原酸钠对K562细胞具有更强的增殖抑制作用,48小时的IC50值为13.177μg/ml,同时对Jurkat细胞也有较明显的增殖抑制作用,48小时的IC50值为13.177μg/ml,作用强度呈现浓度依赖性,但对KG1细胞仍无作用。小檗胺单独作用对K562细胞有明显的增殖抑制作用,其作用强度呈现浓度依赖性。48小时的IC50值为6.080μg/ml。13μg/ml(IC50)的氯原酸钠与不同浓度的小檗胺联合作用对K562细胞的增殖抑制作用略强于小檗胺单独作用于K562细胞。6μg/ml(IC50)的小檗胺与不同浓度的氯原酸钠联合作用对K562细胞的增殖抑制作用明显强于氯原酸钠单独作用于K562细胞。结论1.-20℃避光保存的氯原酸钠可以选择性抑制bcr-abl阳性的CML细胞系K562细胞的增殖。2.4℃保存的氯原酸钠对bcr-abl阳性的CML细胞系K562的增殖抑制作用增强,并且对bcr-abl阴性的Jurkat细胞亦具有增殖抑制作用。3.氯原酸钠与小檗胺具有协同抑制CML白血病细胞K562增殖的作用。