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一、背景与目的在蜕膜化过程中,子宫内膜基质细胞的增殖、分化和子宫的蜕膜螺旋动脉重铸对胚胎着床和正常发育至关重要。蜕膜化异常可导致多种妊娠相关疾病的发生,如胎儿宫内生长受限、反复流产和不孕等。蛋白质糖基化是蛋白质重要的翻译后加工和修饰方式,在多种生理和病理过程中发挥着重要作用,包括胚胎发育、炎性发生和恶性肿瘤等。蛋白质岩藻糖基化是蛋白质糖基化修饰的一类,分为N-岩藻糖基化和O-岩藻糖基化。实验室前期研究发现,O-岩藻糖基转移酶1（po FUT1）催化蛋白质发生O-岩藻糖基化修饰,参与生殖过程,包括子宫内膜蜕膜和滋养层细胞的植入等。腓骨蛋白-1（Fibulin-1）是一种细胞外基质糖蛋白,在蜕膜组织中高表达。Fibulin-1缺失可导致小鼠胚胎神经嵴细胞迁移异常及存活率降低等不良结局。研究发现,Fibulin-1分子上有潜在的O-岩藻糖基化位点,但其O-岩藻糖基化修饰对Fibulin-1功能的影响及在子宫内膜基质细胞的分化和子宫新生血管网络的形成过程中的作用尚不清楚。本研究拟探讨po FUT1调控Fibulin-1上O-岩藻糖对蜕膜及蜕膜血管形成的作用和机制,为阐明子宫蜕膜过程提供理论基础。二、方法1.体外诱导人子宫内膜基质细胞（human endometrial stromal cells,h ESCs）蜕膜化,Western blot,免疫荧光检测蜕膜前后po FUT1及Fibulin-1的表达变化,利用免疫共沉淀检测蜕膜前后Fibulin-1上O-岩藻糖的表达变化。2.上调或下调hESCs细胞中poFUT1的表达,Western blot,免疫共沉淀检测Fibulin-1上O-岩藻糖的变化。3.上调或下调Fibulin-1上O-岩藻糖,Western blot,ELISA及免疫荧光检测Fibulin-1的分泌。4.利用Western blot,免疫荧光检测上调或下调Fibulin-1上O-岩藻糖对蜕膜及蜕膜血管形成的影响;划痕实验检测细胞迁移能力。5.上调或下调Fibulin-1上O-岩藻糖,免疫共沉淀及Western blot检测TGF-β/Smad3信号通路的激活情况。利用Western blot,免疫荧光分析Fibulin-1上O-岩藻糖通过TGF-β/Smad3信号通路对蜕膜及蜕膜血管形成的影响。6.组织免疫荧光检测正常未孕（增生期/分泌期）、正常早孕以及流产子宫内膜组织中Fibulin-1和po FUT1的表达。7.小鼠体内实验,孕D1.5小鼠宫角注射Fibulin-1 c DNA,未注射侧为对照,利用免疫组织化学染色在体内验证Fibulin-1对子宫内膜蜕膜及蜕膜血管形成的影响。三、结果1.联用MPA和dbcAMP后,蜕膜标志物（PRL,IGFBP1）显著增多,po FUT1,Fibulin-1及Fibulin-1上O-岩藻糖的表达增加。2.Western blot和免疫共沉淀结果显示,转染po FUT1 sh RNA下调Fibulin-1上的O-岩藻糖,转染poFUT1 cDNA上调其表达,转染po FUT1 mutant c DNA对Fibulin-1上的O-岩藻糖无明显影响。3.Western blot,ELISA及免疫荧光结果显示,转染po FUT1 sh RNA减少Fibulin-1的分泌,转染po FUT1 c DNA增加其分泌,转染po FUT1 mutant c DNA无明显变化。4.Western blot与免疫荧光结果显示,转染po FUT1 sh RNA减少PRL,IGFBP1,CD31,VE-Cadherin的表达,转染po FUT1 c DNA增加PRL,IGFBP1,CD31,VE-Cadherin的表达。划痕实验结果显示,转染po FUT1 sh RNA抑制细胞迁移能力,转染po FUT1 c DNA促进细胞迁移能力。5.上调Fibulin-1分子上的O-岩藻糖修饰促进Fibulin-1与潜伏状转化生长因子结合蛋白1（latent transforming growth factor binding protein 1,LTBP1）结合,激活TGF-β/Smad3信号通路,并促进PRL,IGFBP1,CD31,VE-Cadherin表达。下调Fibulin-1上O-岩藻糖后结果相反。6.收集人增生期、分泌期、早孕期及流产子宫内膜组织行免疫荧光染色,结果显示,在增生、分泌及早孕期,po FUT1与Fibulin-1的表达依次递增,而在流产子宫内膜组织中两者的表达都降低。7.孕D1.5小鼠宫角注射Fibulin-1 c DNA后,胚胎着床率增加（D8）。免疫组织化学结果显示,正常妊娠小鼠在注射Fibulin-1 c DNA后,激活TGF-β/Smad3信号通路促进了蜕膜与蜕膜血管形成。四、结论1.上调Fibulin-1分子上的O-岩藻糖修饰,激活TGF-β/Smad3信号通路促进h ESCs蜕膜及蜕膜血管形成。2.在人子宫内膜组织中,po FUT1及Fibulin-1的表达减少会造成不良妊娠结局。3.在小鼠子宫内膜组织中,Fibulin-1高表达可促进子宫内膜蜕膜。