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第一部分鼻咽癌患者Tim-3调控细胞免疫功能和TAMs极化的研究目的:1.明确鼻咽癌患者Tim-3在外周血免疫细胞的表达及其与肿瘤进展的关系,评估鼻咽癌患者细胞免疫功能;2.阐明鼻咽癌患者肿瘤微环境Tim-3在巨噬细胞上表达、巨噬细胞极化的情况及其与肿瘤进展的关系。方法:收集30例在桂林医学院附属医院2019年8月至2020年1月经病理确诊为鼻咽癌的新入院患者和22例正常对照者外周血标本和临床资料,FCM检测外周血单核细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比以及Tim-3在各免疫细胞上的表达;ELISA检测外周血血清和PBMCs经PHA和LPS刺激后分泌细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-10和IL-12)水平。于病理科收集鼻咽癌肿瘤和正常鼻咽上皮组织蜡块,应用组织免疫荧光双染技术检测鼻咽癌组织和正常鼻咽上皮组织Tim-3、CD68和CD163表达水平,并分析其与肿瘤特征的关系。结果:1.鼻咽癌患者CD14+CD64+单核细胞百分比明显高于对照组(3.00%±0.14%vs.2.24%±0.23%,P<0.05),CD4+/CD8+比值明显降低(1.422%±0.13 vs.1.852%±0.1763,P<0.05),差异有统计学意义。IVA-B期的鼻咽癌患者CD4+T淋巴细胞百分比明显低于I–III期的鼻咽癌患者(3.42%±0.32%vs.5.07%±0.49%,P<0.05),差异具有统计学意义。2.鼻咽癌患者外周血抗肿瘤细胞因子IFN-γ(pg/m L)明显低于正常对照组(3.19±0.37 vs.8.81±0.66,P<0.05),PBMCs经PHA刺激后,分泌IFN-γ低于对照组(70.67±3.37 vs.87.30±6.64,P<0.05)。细胞因子TNF-α差异无统计学意义。3.鼻咽癌患者Tim-3+CD14+CD64+单核细胞(14.99%±2.13%vs.8.46%±1.63%,P<0.05)和Tim-3+CD3+CD4+T细胞百分比(1.03%±0.09%vs.0.72%±0.09%,P<0.05)明显升高,差异具有统计学意义。Tim-3在单核细胞和T细胞上的表达与肿瘤分期相关,IVA-B期鼻咽癌患者Tim-3+CD14+CD64+单核细胞(22.72%±3.63%vs.10.66%±1.95%,P<0.05)和Tim-3+CD3+CD4+T细胞(1.27%±0.16%vs.0.84%±0.09%,P<0.05)明显高于肿瘤分期为I–III期的鼻咽癌患者。相关性分析显示鼻咽癌患者Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比与CD4+/CD8+比值呈负相关性(r=-0.430,P<0.05),说明随着Tim-3在单核细胞和T细胞上的表达越高,细胞免疫功能受损和肿瘤进展越严重。4.鼻咽癌肿瘤组织Tim-3、CD163以及Tim-3+CD163+TAMs荧光密度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Tim-3在肿瘤组织表达与肿瘤分期(r=0.496,P<0.05)和CD163表达(r=0.685,P<0.05)呈正相关。5.鼻咽癌患者外周血M1相关细胞因子IFN-γ降低(3.19±0.37 vs.8.81±0.66,P<0.05),IL-12升高(28.25±2.35 vs.14.72±1.66,P<0.05),TNF-α差异无统计学意义(P>0.05);M2相关细胞因子IL-10升高(16.63±1.10 vs.12.37±1.29,P<0.05)。PBMCs经LPS刺激后,鼻咽癌患者M1细胞因子IL-12(111.06±2.07 vs.33.04±5.28,P<0.05)和M2细胞因子IL-10(39.54±7.65 vs.12.93±1.99,P<0.05)升高显著;正常对照组M1细胞因子IL-12升高显著(83.66±8.01 vs.15.99±2.11,P<0.05),而M2细胞因子IL-10变化差异无统计学意义(19.72±2.82 vs.14.43±1.79,P>0.05)。结论:Tim-3通过抑制鼻咽癌患者细胞免疫功能和调控巨噬细胞向M2极化来参与肿瘤进展。第二部分鼻咽癌患者PD-1在外周血表达水平及临床意义目的:探讨PD-1在鼻咽癌患者外周血单核细胞和T淋巴细胞表达水平及其意义。方法:FCM检测鼻咽癌患者和健康对照者PD-1在单核细胞、CD4+T和CD8+T细胞上的表达、治疗前后的变化。结果:1.鼻咽癌和正常对照组间以及不同肿瘤分期的鼻咽癌患者间PD-1在单核细胞(21.88%±2.29%vs.16.34%±2.07%,P>0.05)、CD4+T细胞(30.46%±1.53%vs.28.94%±1.40%,P>0.05)和CD8+T细胞(33.6%±2.02%vs.29.56%±2.37%,P>0.05)上的表达差异无统计学意义。2.鼻咽癌患者PD-1和Tim-3在单核细胞上表达呈正相关(r=0.529,P<0.05)。3.治疗后,PD-1在单核细胞上表达明显上调(20.16%±1.19%vs.33.15%±2.233%,P<0.05),差异有统计学意义。结论:Tim-3表达对促进鼻咽癌患者肿瘤进展的作用较PD-1显著而且二者之间可能存在协同关系,因此联合阻断可能成为鼻咽癌免疫治疗的优选方案。