抗性棉铃虫神经细胞的分离培养及其神经敏感性降低机制的膜片钳研究

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棉铃虫(Helicouetpa armigera)(Hubner)为重要农业害虫,目前几乎对所有杀虫剂均 产生了抗药性.神经敏感性降低是其对神经性毒产生抗性的主要机制之一.应用膜片钳技术直接以棉铃虫幼虫神经细胞为研究对象,分析在正常及杀虫剂处理条件下Na<+>、Ca<+>等电压门控通道的门控动力学变化.该文建立了棉铃虫幼虫神经细胞离体培养方法,并成功分离培养了棉铃虫幼虫中枢神经细胞.神经细胞极易形成高阻封接,适合于膜片钳研究.全细胞膜片钳研究显示,棉铃虫幼虫神经细胞至少表达四种电压门控性离子通道:TTX-敏感钠通道、高电压激活钙通道、延迟整流钾通道和瞬时整流钾通道.钠通道在-35mV左右激活,I<,Na>在-10mV左右达到峰值;钙通道在-30mV左右激活,I<,Ca>在0-10mV达峰值;瞬时整流钾 通道在-40mV左右激活,快速失活;延迟整流钾通道在-40mV激活,几乎不失活.对棉铃虫幼虫腹神经节超微结构分析显示神经节膜(NL)与神经围鞘(PN)随龄期增长而加厚,而且抗性幼虫PN与NL厚度之和大于敏感幼虫的.这表明高龄幼虫比低龄幼虫对神经毒性杀虫剂有更高耐药性与PN+NL加厚有关,同时提示这种加厚也是抗性棉铃虫神经敏感性降低的原因之一.
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