放线菌酮诱导HL-60细胞凋亡及其线粒体变化研究

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目的: 建立放线菌酮(CHX)诱导HL-60细胞凋亡模型,并探讨该过程中的线粒体变化;同时,在该过程中分别阻断ERK和p38途径,研究细胞凋亡和线粒体变化,探讨CHX诱导HL-60细胞凋亡过程与这两个信号通路之间的关系。 方法: 利用PD和SB分别在CHX诱导HL-60细胞凋亡过程中阻断ERK和p38途径。通过AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术测定凋亡和坏死细胞比率;通过PI染色流式细胞术测定亚二倍体峰细胞比率;应用JC-1染色共聚焦显微镜和Horchest染色荧光显微镜进行观察与拍摄。通过JC-1染色流式细胞术,计算线粒体膜电势((?)2/(?)1),通过划分具有不同荧光强度的细胞群和反向射门,分析细胞凋亡过程中线粒体与细胞物理参数间的关系,并通过FL-2分析与比较不同时点低J—agregate的细胞比率。利用NAO染色流式细胞术检测实验组线粒体质量和H2DCFDA/PI染色流式细胞术检测ROS含量。应用DiOC6(3)/Annexin V-APC双染
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