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RecA/Rad51家族蛋白在进化上是非常古老而又保守的蛋白家族。大肠杆菌RecA基因在同源重组、DNA修复、SOS途径、突变和细胞分裂中起重要作用。人Rad51基因是大肠杆菌RecA基因的直向同源基因,两者起源于同一个祖先基因。人Rad51基因主要参与DNA的修复和重组,并且与肿瘤发生关系密切。原核细胞与真核细胞最大的区别在于原核细胞没有以核模为界限的细胞核,而蛋白质的入核转运机制是一个十分复杂的生物学过程,需要核孔复合体(NPC)、核定位信号(NLS)、核转运受体、RanGTP蛋白等共同参与。 在HeLa细胞中,人Rad51蛋白定位于细胞核中,相反,作为人Rad51的同源基因,大肠杆菌RecA基因编码的蛋白却定位于细胞质中。于是我们猜测在低等的大肠杆菌到高等的哺乳动物进化过程中,RecA可能通过突变使其进入到细胞核中行使生物学功能,为了了解这个突变,我们进行了一系列的探索。 我们首先借助生物信息学方法预测了Rad51的核定位信号序列(第205-211位氨基酸),并把这段序列拼接到RecA C末端,虽然没有使RecA从细胞质转移进细胞核,但这为我们接下来的尝试提供了思路。于是我们比对了人Rad51和大肠杆菌RecA氨基酸序列,用Rad51某些片段替换大肠杆菌RecA的相应片段,把引导RecA入核的序列范围从Rad51的81-204位氨基酸缩小到第200-204位氨基酸,最终靶定到Rad51的T200/Y204这两个氨基酸,也就是说只要把大肠杆菌RecA的S221/D225突变为Rad51的T200/Y204,RecA就可以从HeLa细胞的细胞质转移到细胞核中。不过,我们把Rad51的T200/Y204突变为RecA的S221/D225却不能使Rad51出核。 本论文通过以上探索得知,大肠杆菌RecA基因S221T/D225Y双点突变能使RecA由HeLa细胞质进入细胞核。于是我们提出这样一个可能性,从RecA到Rad51进化过程中,只需要把RecA的S221/D225这两个氨基酸突变为Rad51的T200/Y204就可以使其进入到真核细胞的细胞核中。