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药用真菌是我国传统中药的重要组成部分,在我国分布广泛,资源丰富,其次生代谢产物种类繁多、数量巨大,具有化学调节、抗肿瘤、提高免疫、抗感染等多种生理作用,充分挖掘药用真菌的次生代谢产物可为临床药物提供更多的先导单体化合物或者直接的药用活性成分。在实验室条件下,药用真菌绝大多数生物沉默合成基因簇处于沉默状态,不表达或者表达量很低。桑黄(Inonotus sanghuang)与冠突散囊菌(Eurotium cristatum)是重要的药用真菌,是值得深入开发利用的2种药用真菌。在人工培养下的桑黄,产生的次生代谢产物分离鉴定不到十种,而在野生状态下的桑黄能分离鉴定50多种;基因组测序表明,冠突散囊菌有39个次生代谢生物合成基因簇,目前,从冠突散囊菌分离的化合物仅有十几种。因此,迫切的需要采用一定的策略激活沉默的生物合成基因簇,从而获取更多的代谢产物。1、研究共培养方法对冠突散囊菌和桑黄产生次级代谢产物的影响,结合高效液相色谱(HPLC)测定分析,对冠突散囊菌与桑黄的单培养及其共培养发酵产物进行差异性分析。结果表明,冠突散囊菌(E.cristatum)和桑黄(I.sanghuang)共培养发酵产物,95%乙醇提取,乙酸乙酯萃取相HPLC图谱中Rt=6.5-7.0min内出现了2个新的吸收峰,推测两者共培养产生了新的化合物。2、探讨冠突散囊菌激发子与蓝光照射对桑黄次生代谢的影响。在桑黄生长期间添加冠突散囊菌激发子,蓝光照射培养,以未添加激发子和蓝光照射的桑黄、单纯冠突散囊菌激发子为对照,发酵物乙醇提取后,乙酸乙酯萃取相进行HPLC图谱差异性分析。结果表明,桑黄在添加冠突散囊菌激发子培养后,在Rt=19.584min、38.142 min、45.771 min三个时间点出现了3个新的吸收峰,而在冠突散囊菌激发子、单培养桑黄发酵时,并没有这3个吸收峰的出现。说明桑黄在培养过程中添加激发子与蓝光照射对其的作用使得它们产生了新的次级代谢产物。3、利用Illumina HiSeq高通量测序技术对桑黄进行转录组测序,一共测了39.6 Gb数据。组装并去冗余后得到42,266个Unigene,总长度、平均长度、N50以及GC含量分别为83,891,727 bp、1,984 bp、3,678 bp和49.88%。然后将Unigene比对到七大功能数据库进行注释,最终分别有31,474(NR:74.47%)、7,789(NT:18.43%)、20,462(SwissProt:48.41%)、21,231(KOG:50.23%)、23,067(KEGG:54.58%)、8,871(GO:20.99%)以及22,653(InterPro:53.60%)个Unigene获得功能注释。使用Transdecoder检测出54,420个CDS。同时还检测出4,516个SSR分布于3,280个Unigene中。从数据得知,桑黄在被真菌激发子以及蓝光的刺激下,对桑黄细胞的生物过程、新陈代谢比较活跃,其次生代谢产物合成途径等基因上调,使得桑黄次生代谢产物丰富。这些数据将为桑黄被真菌激发子、蓝光刺激时所产生的一些未知新代谢产物的合成途径奠定研究基础。4、本部分主要探讨桑黄与冠突散囊菌对中药材的转化作用。以大米-金银花、大米-金银花叶为底物进行固体发酵,将发酵产物用95%乙醇超声辅助提取。采用高效液相色谱(HPLC)分析金银花发酵前后指纹图谱差异性与活性成分的含量变化,通过双层平板打孔法比较金银花发酵前后95%乙醇提取物的抑菌活性的差异。结果表明:金银花固体发酵后绿原酸和芦丁分别降低了20.14 mg/g、1.73mg/g,而木犀草素发酵后增加了4.76 mg/g;物质a、b的含量也显著上升,在HPLC图中Rt=17.5 min后吸收峰明显丰富;金银花叶在发酵后绿原酸、芦丁同样分别降低了11.74 mg/g、0.99 mg/g,而木犀草素增加了5.07 mg/g;并且金银花发酵产物的95%乙醇提取物抑菌活性明显强于未发酵以及对照组。冠突散囊菌、桑黄能够在许多药材上生长发酵,利用这两种药用真菌发酵葛根、黄芪不仅能够提高药材的总黄酮量,提高某些化合物的含量,还能使药性基质产生新的物质。