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背景及目的艾滋病人感染HIV后损伤中枢神经系统（CNS）导致的艾滋病毒相关神经认知紊乱（HAND）。HAND的发病机制目前尚不明确,HIV感染后并不会直接引起神经元损伤,而是通过感染单核细胞等透过血脑屏障（BBB）进入中枢神经系统。研究发现HIV病毒释放的相关蛋白是促进HAND发生发展的主要因素之一。HIV调节蛋白Tat是一个关键的病毒跨神经元损伤因子,是转录反式激活因子,对转录的调控、病毒复制十分重要。Tat可以通过产生氧化应激引起神经元损伤,造成认知功能障碍。最近研究发现HIV感染的病人经过抗逆转录病毒疗法（ART）治疗后外周血中髓源抑制性细胞（MDSCs）比例高于健康人。研究发现健康人的MDSCs能够直接被HIV感染,并且可促进病毒的复制及传播,HIV感染或HIV Tat蛋白均可以刺激人MDSCs的扩增。细胞骨架维持细胞的基本生理功能,在病理情况下常出现骨架系统异常。细胞凋亡是机体清除有害细胞维持机体正常细胞增殖的生理过程,抗凋亡蛋白的表达参与维持正常的细胞凋亡调控。目前未见关于HIV Tat感染的MDSCs细胞对神经元细胞的影响作用的研究。本研究旨在探究HIV/Tat1-86蛋白对MDSCs的亚型、功能影响,而后建立MDSCs与神经元非接触共培养模型,探索HIV/Tat1-86处理后的MDSCs对神经元细胞骨架及抗凋亡蛋白表达的影响来研究HIV/Tat1-86对神经元损伤作用机制。方法1、细胞培养:取成年Balb/c小鼠大腿骨提取骨髓细胞,使用流式细胞分选仪（FACS）分选Balb/c小鼠骨髓细胞中Gr-1+CD11b+MDSCs培养,分为5组:用不同浓度HIV/Tat1-86（0、12.5、25、50、100nM）处理12h;利用美天旎小鼠MDSC亚群分选试剂盒分选MDSCs亚群细胞,各亚群细胞分为5组,用不同浓度HIV/Tat1-86（0、12.5、25、50、100nM）处理12h;取Balb/c胎鼠大脑皮质培养大脑皮层原代神经元细胞,分为4组,分别为:神经元组;神经元+MDSCs组;神经元+HIV/Tat1-86-MDSCs组;神经元+HIV/Tat1-86-MDSCs+抑制剂组。2、流式细胞仪检测MDSCs各亚型细胞比例的变化:HIV/Tat1-86不同浓度处理MDSCs后,抗小鼠CD11b标记MDSCs,G-MDSCs和M-MDSCs亚型细胞分别用Ly6G,Ly6C标记。3、ELISA法检测MDSCs细胞因子:HIV/Tat1-86不同浓度处理MDSCs后,取细胞培养上清液用ELISA法检测MDSCs分泌的细胞因子活性氧簇（ROS）、精氨酸酶1（Arg1）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的量。4、神经元细胞的处理:将HIV/Tat1-86（100nM）处理12小时的MDSCs(文中以HIV/Tat1-86-MDSCs表示)及未经处理的MDSCs与小鼠神经元通过Transwell小室建立非接触式共培养模型,按照分组进行不同的处理。5、荧光显微镜观察神经元骨架重排:用FITC-Phalloidin染色小鼠神经元细胞聚合的微丝（F-actin）,荧光显微镜观察和拍照,计算F-actin重排变化情况。6、Western-blot检测神经元抗凋亡蛋白Survivin蛋白表达情况。7、数据统计分析:所有实验至少重复三次,用SPSS 21.0统计软件对数据进行处理,P<0.05为差异有统计学意义。结果1、HIV/Tat1-86对MDSCs细胞的影响:不同浓度HIV/Tat1-86（0、12.5、25、50、100nM）作用于G-MDSCs和M-MDSCs后,两亚型细胞的比例呈浓度依赖性升高,在100nM表达更明显（P<0.01）,其中以M-MDSCs的增生更明显。2、HIV/Tat1-86对MDSCs细胞功能的影响:不同浓度HIV/Tat1-86（0、12.5、25、50、100nM）处理的MDSCs释放的细胞因子Arg1、ROS、iNOS含量增加,以100nM含量增加最明显（P<0.05）。3、HIV/Tat1-86-MDSCs对神经元的作用:HIV/Tat1-86（100nM）处理12小时的MDSCs与神经元非接触式共培养12小时后,与对照组相比神经元细胞内phalloidin表达明显减少（P<0.01）,Survivin表达降低（P<0.01）,但在阻断效应分子Arg1、ROS、iNOS的作用后,神经元细胞内phalloidin表达明显增加（P<0.01）,Survivin表达明显升高（P<0.01）。结论HIV/Tat1-86可以促进MDSCs的增生与活化,其中以M-MDSCs的增生更明显。活化后的MDSCs细胞因子Arg1、ROS、iNOS的分泌量增加,可使神经元发生骨架重排,抗凋亡分子Survivin表达减少从而造成神经元凋亡增加。