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目的:通过构建慢病毒表达载体介导siRNA沉默Id-1,观察其对人肝癌HepG2裸小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其对ERK1/2信号通路的影响,探讨其参与原发性肝细胞癌增殖的可能机制,为寻找原发性肝细胞癌新的治疗靶点提供实验依据。方法:构建设计以Id-1基因为靶序列的5个慢病毒表达载体介导的shRNA,生产收集慢病毒上清液(3×106TU/ml),转染肝癌HepG2细胞系,筛选稳定沉默Id-1基因表达的细胞系,RT-QPCR鉴定筛选最佳沉默效果的细胞系。18只BALA/c nu/nu系雄性裸小鼠随机分为3组,即转染实验组(Id-1-RNAi-Lentivirus)、阴性对照组(GFP-lentivirus)、空白对照组(正常HepG2细胞),每组6只。分别取细胞浓度为5×106/ml的干扰效率最佳的稳定转染细胞系、稳定转染空载体病毒细胞系、正常培养未干扰的HepG2细胞系悬液各0.2ml,在裸鼠右腋皮下注射,连续观察28天,期间每周测量肿瘤体积、裸鼠体重,绘制肿瘤生长曲线,28天后处死裸鼠,制作肿瘤组织标本,行常规病理检查,半定量RT-PCR、Western bolt检测Id-1、ERK1/2、p-ERK1/2mRNA及蛋白水平的表达。结果:倒置荧光显微镜观察转染前后细胞形态学变化不明显;RT-QPCR检测sh31肝癌HepG2稳定细胞系Id-1沉默效果最佳,与稳定转染空载体病毒细胞系相比降低80%以上,与未干扰的HepG2细胞相比降低了60%左右;裸鼠成瘤3-5天后,可在皮下触到直径约3mm-4mm肿瘤结节,成瘤率100%,转染实验组瘤体增长缓慢,阴性对照组及空白对照组瘤体增长迅速;病理组织学显示:肉眼观察,实验组的裸鼠皮下肿瘤体积明显较对照组小。镜下观察,空白对照组及阴性对照组肿瘤细胞密集排列,片状坏死区面积较小,核大深染,可见核分裂象,核固缩较少。实验组肿瘤细胞呈大片状坏死,空泡性变,多数细胞核完全溶解,细胞结构消失,呈均质、红染表现,可见多数凋亡细胞;RT-PCR显示转染实验组Id-1、ERK1/2、p-ERK1/2mRNA表达水平明显降低,与对照组相比差别有统计学意义(P<0.05);Western bolt显示转染实验组Id-1、p-ERK1/2蛋白表达水平亦明显下调,与对照组相比差别有统计学意义(P<0.05),而ERK1/2蛋白表达变化不明显(P>0.05)。结论:通过构建携带Id-1基因特异性siRNA的慢病毒表达载体,并转染肝癌HepG2细胞系稳定沉默Id-1基因的表达及采用肝癌HepG2细胞系在裸小鼠皮下注射移植成瘤建立肝癌模型的方法是有效和可行的。下调Id-1表达后,可以有效地抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制肿瘤细胞的增殖,且ERK1/2的活性形式p-ERK1/2也随之表达减少,推测Id-1可能通过调节ERK1/2MAPK信号通路参与肝癌的发生发展。Id-1在肝细胞癌中的高表达及下调Id-1后可有效抑制肝细胞癌增殖,提示抑制靶基因Id-1的表达可能为肝癌的基因治疗提供一种新的治疗途径。