生长抑素(SS)是下丘脑核团分泌的神经调节肽，与生长激素释放激素(GHRH)一起，分别起到抑制和促进生长激素(GH)分泌的作用，参与生长激素和生长的调节，是生长发育调节的重要激素。应用SS主动或被动免疫及基因免疫动物，可使体液中SS水平下降、促进GH的分泌，从而达到促进动物生长的目的。而建立操作简便、准确可靠的SS及其抗体检测方法，对检测基因疫苗的有效性及其作用机理研究具有重要的意义。为了建立抗SS抗体的ELISA(酶联免疫分析法)检测方法，以用于本室SS基因疫苗作用检测及其机制研究，本研究应用生物信息技术原理，通过分析SS和辣根过氧化物酶(HRP)的一级、二级和三级结构和多种理化性质，推测出二者的最佳偶联部位。然后，应用化学偶联法合成SS-HRP酶标记物，并对其进行多项质量监测。最后，建立检测抗SS抗体的直接ELISA检测方法，并用于实际的SS基因免疫小鼠血中抗SS抗体水平的检测。 一、对SS和HRP的分子结构和理化性质分析 应用生物信息学原理，分析SS和HRP的一级结构、二级结构和三级结构信息资料，包括分子表面、静分子电场、理化性质分析(如亲／疏水性、等电点、抗原性、可溶性等)。结果表明，SS的三级空间构型可以使其氨基酸侧链的可偶联基团得以充分展开，HRP的三级结构可以在一定程度上(＞50％)使其氨基酸侧链的可偶联基团外露，二者均适宜用于化学偶联反应。并且，为下一步进行SS与HRP相应基团的化学偶联提供了可偶联基团的数目与比例(SS，4，28.54％；HRP，37，11.9％)、可偶联部位、适宜的偶联缓冲体系等理论依据。 二、两种化学偶联法制备酶标记物(SS-HRP)及其质量比较 应用两种化学偶联法——EDC法和高碘酸钠法，分别制得SS-HRP偶联物，并对其进行了紫外—可见光分光光度计扫描检测。依据扫描结果，对HRP的质量、偶联物的光吸收性质、吸收峰值进一步分析。分析结果表明，偶联产物较其偶联前，各波长下的吸光值和特征吸收峰位置及高度发生了明显变化(从278-180 nm变到250-300 nm，从403 nm变到402 nm)。并且发现，由高碘酸钠法得到的偶联产物中的HRP的浓度、HRP标记率和HRP—SS摩尔比(分别为0.809 mg／ml，115.3％和1：30)，略高于EDC法得到的结果(分别为0.534 mg／ml，74.8％和1：23)。 三、ELISA方法的建立、优化和有效性验证 用分别含有上述两种方法制得的SS-HRP偶联产物进行ELISA方法的建立、优化，并分别对其ELISA方法的可重复性、有效性、灵敏性、剂量—吸光度依赖性曲线(即标准曲线)、最小检出限作出鉴定。鉴定结果表明，用EDC法偶联所得产物较高碘酸钠法在所构建的相应ELISA方法的结果可重复性、灵敏性、剂量—吸光度