目的:肌萎缩侧索硬化（amyotrophiclateralsclerosis，ALS）是一种进行性致死性神经退行性疾病，以上下运动神经元受损为特征。临床表现为肌无力，肌萎缩，呼吸肌麻痹，平均生存期为3-5年。ALS中运动神经元的损伤和凋亡机制复杂，有多种机制参与，包括错误折叠蛋白聚集、氧化应激、钙离子超载、谷氨酸兴奋毒性、营养因子缺乏、线粒体功能障碍等。这些病理机制可能相互作用，促进了疾病的发生发展。前期试验中我们发现，ALS中线粒体的分裂和融合及其线粒体自噬存在障碍。　　自噬(autophagy)是真核细胞的一种保护机制，可以通过自噬清除细胞内的许多有害物质。自噬能够隔离包裹分解陈旧、过剩、损伤或者异常的细胞器和其它胞浆成分，为细胞的正常生存、更新提供稳定的环境，保障细胞高效率的新陈代谢，从而实现机体的平衡稳定。自噬包括巨自噬、小自噬和分子伴侣介导的自噬三种方式。目前许多研究关注巨自噬，巨自噬也是我们此次研究的方向。微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associatedprotein1lightchain3，LC3)是酵母菌自噬相关基因Atg8在哺乳动物的同源体。LC3有三种亚蛋白LC3A、LC3B、LC3C。LC3Ⅰ和LC3Ⅱ是LC3在细胞内的两种存在形式。LC3Ⅰ位于胞浆中是可溶性物质，LC3Ⅱ位于胞膜上与磷脂结合。LC3Ⅱ是自噬泡的组成成分，是自噬的标记物。自噬增强时，LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转变增多。在许多神经退行性疾病中，胞浆、胞核或者细胞外基质聚集有破损的细胞器和异常蛋白质等成分，这些异常聚集的物质具有细胞毒性，能够诱导细胞凋亡。细胞可以通过自噬清除有害物质，自噬维持了细胞内环境的稳定。自噬也就成为治疗神经退行性疾病的靶点。　　白藜芦醇(resveratrol，res)是一种自然源性酚类物质。有报道，在阿尔兹海默病(Alzheimersdiseases，AD)、帕金森病(Parkinsonsdisease，PD)中，白藜芦醇可以激动Sirt1(silentmatingtypeinformationregulation2homolog1)或者AMPK(AMP-activatedproteinkinase)，从而诱导自噬，提高LC3水平。自噬的增强可以更好的降解异常蛋白，保护神经元。AD、PD和ALS都是神经变性病，白藜芦醇在ALS中是不是也可以调节自噬，影响LC3水平，保护神经元呢？本实验我们试图观察，随着疾病的进展，LC3B在SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中的动态变化，及其予以白藜芦醇后，SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中LC3B的变化，进一步了解ALS的病理机制，探讨白藜芦醇通过影响自噬治疗ALS的可行性。　　方法:实验组实验对象选取SOD1-G93A转基因小鼠，依据病程分为症状前期组（60d组）、症状早期组（onset组）、终末期组（end组），对照组实验对象选取90天野生型小鼠，每组6只小鼠。从70天开始，予以SOD1-G93A小鼠三种不同处理方式，直至症状早期或者终末期取材。三种不同处理方式分别为:白藜芦醇组予以白藜芦醇溶剂(30mg/kg/d)，溶剂组予以同等体积酒精溶剂，空白组未予处理。症状早期和终末期的不同处理组均有6只小鼠用于实验。腹腔注射10％水合氯醛(350mg/kg)，麻醉小鼠后，处死小鼠，取腰髓和运动皮层投入液氮冷冻，保存于-80℃冰箱;经心脏灌注4％多聚甲醛，剥离小鼠腰髓和运动皮层，用4％多聚甲醛浸泡保存。利用Westernblot技术、免疫组织化学技术、激光共聚焦技术，观察LC3B在各时期及各种不同处理方式下小鼠腰髓和运动皮层中的变化。数据应用spss13.0统计软件进行分析。　　结果:　　1、不同时期SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的含量:应用Westernblot技术检测到，与对照组相比，症状早期和终末期SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中LC3BⅡ表达量增加，症状前期LC3BⅡ表达量无明显变化。免疫组织化学显示，与对照组相比，症状早期和终末期SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中运动神经元减少，LC3B表达量增加，症状前期LC3B表达量无明显差异。激光共聚焦技术检测LC3B与SMI32共定位情况，与对照组相比，症状早期和终末期SOD1-G93A小鼠腰髓运动神经元中LC3B表达量增加，症状前期LC3B表达量无明显差异。　　2、白藜芦醇对SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B含量的影响:　　2.1症状早期:应用Westernblot技术检测到，与空白组相比，在SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中，白藜芦醇组LC3BⅡ水平有升高趋势，溶剂组LC3BⅡ水平显著升高。应用免疫组织化学技术检测到，白藜芦醇组和溶剂组SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中LC3B表达增加。应用激光共聚焦技术检测LC3B与SMI32共定位情况，发现白藜芦醇组和溶剂组SOD1-G93A小鼠腰髓运动神经元中LC3B表达增加。　　2.2终末期:应用Westernblot技术检测到，白藜芦醇组、溶剂组、空白组，三组间SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3BⅡ表达无差异。应用免疫组织化学技术检测到三组间SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B表达无差异。应用激光共聚焦技术检测到LC3B在三组间SOD1-G93A小鼠腰髓运动神经元表达无差异。　　结论:　　1、随着疾病的进展，SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中LC3B水平逐渐升高，表明自噬有增强的趋势。　　2、白藜芦醇对SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层中LC3B的表达影响有限，白藜芦醇通过影响自噬发挥保护神经元的作用需要进一步研究。