论文部分内容阅读
肿瘤基因治疗是指将有治疗作用的目的基因通过一定的方式导入靶细胞,使其获得特定的功能,继而执行或介导对肿瘤细胞的杀伤和抑制作用,达到治疗肿瘤的目的;寻找治疗各类恶性肿瘤的靶基因近年来也成为研究热点。转录因子FOXA1隶属于FOX转录因子家族,已有研究发现FOXA1参与调控细胞的增殖和分化、器官发育、胚胎发生及肿瘤的发生发展等生理病理过程。在肿瘤细胞中,FOXA1能介导细胞周期相关基因的表达,从而调控细胞周期的进展。本文在此基础上,主要研究FOXA1对乳腺癌细胞增殖影响,探究FOXA1调控细胞增殖的分子机制。本文以乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30为研究对象,用介导FOXA1shRNA的慢病毒感染FOXA1内源性高表达的乳腺癌细胞株MCF-7,特异性敲除FOXA1的表达;同时用高表达FOXA1的慢病毒感染FOXA1内源性低表达的乳腺癌细胞株ZR-75-30。通过WB和SqRT-PCR等实验方法检测FOXA1的表达水平,同时考察细胞周期依赖性激酶抑制因子P21、P27的表达变化。结果发现FOXA1的表达与P21、P27的表达呈正相关性,预示FOXA1可能对P21、P27的转录水平有调节作用,进而参与细胞周期调控。然后,我们考察了FOXA1对乳腺癌细胞增殖的影响,通过细胞生长曲线的绘制和流式检测细胞的周期,发现高表达FOXA1能有效抑制乳腺癌细胞株ZR-75-30的增殖,并使细胞明显被阻滞在G0/G1期。通过CHIP实验,发现FOXA1能够与P21、P27的启动子区域结合。然后我们构建了包含有P21、P27的-5000kb启动子区域的重组质粒,将重组质粒与FOXA1表达质粒共转染进ZR-75-30细胞,通过测定荧光素酶实验考察P21和P27的转录活性的变化,发现FOXA1的高表达能有效提高P21和P27的转录水平。综合本文实验结果表明,在乳腺癌细胞株ZR-75-30中高表达FOXA1能有效抑制细胞的增殖,我们发现的分子机制是FOXA1的高表达能够有效提高P21和P27的转录水平,导致细胞周期停滞,进而细胞增殖受到抑制。