猪繁殖与呼吸综合征病毒的RNA多态性研究

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2006我国南方地区发生了以高热、高发病率、高死亡率为特征的传染病。而后蔓延到全国大部分养猪地区,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。该病于2006年7月传入福建省,之后在我省迅速蔓延传播。本试验的目的是利用mRNA差异显示技术,建立PRRSV多态性研究的方法,并通过此技术获得病毒变异相关基因片段。本实验采用mRNA差异显示技术,以实验室分离保存的普通型PRRSV-FJ02A株、变异型PRRSV-FJ06A株、变异型PRRSV-FJ07A株、变异型PRRSV-FJ08A株等4株病毒为实验材料,进行四株病毒的基因差异表达分析。采用3条锚定引物和20条随机引物进行mRNA差异显示试验,试验经过引物筛选、变性聚丙烯酰氨凝胶电泳、银染等过程最后筛选获得10条差异表达片段。将其中两条片段进行回收,将这两条片段分别连接到T载体上,然后转化到DH5α上,接着挑菌、提取质粒,通过酶切鉴定,筛选出阳性克隆,最后进行测序。测序结果表明:在这两个片段的两端均分别有mRNA差异显示技术所用引物的结合位点,片段大小也与PCR扩增出来的条带大小相一致,片段长度分别为209bp和272bp进一步证实了目的片段的正确性。使用NCBI的blast程序和DNASTAR软件;对这两个片段的进行序列分析,结果表明引物组合锚定1-S2差异片段与数据库中其他PRRSV全基因序列相似性较低。两个差异片段与VR2332株比较核苷酸同源性分别78.9%和68.6%。并且这两个片段分别在不同部位出现不同程度的碱基突变或缺失,因此初步推测这两个差异片段是可能导致PRRSV变异的片段,利用mRNA差异显示技术可以获得猪繁殖与呼吸综合征病毒变异的相关基因。
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