论文部分内容阅读
小叶莲为小檗科鬼臼亚科桃儿七属Sinopodophyllum桃儿七Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying的干燥成熟果实,作为传统藏药鬼臼药源之一收载于历代本草专著中。该药材主要分布在我国西藏、甘肃、青海、陕西、四川、云南和东南亚等高海拔地区。临床上常用于治疗血瘀经闭、胎盘不下、难产死胎等妇科病症,细粉外敷也可治黄水疮等皮肤癣病。现代药理学研究表明小叶莲提取物对乳腺癌有一定的治疗作用。此外,小叶莲可能有其他潜在的临床用途如降血脂、抗氧化、抗肝癌等等。小叶莲于1995年版《中国药典》开始收录,目前国内外未见其他有关小叶莲药材标准。作为同植物根及根茎入药的桃儿七也仅在《香港中药材标准》第八册和《甘肃省中药材标准》2009年版中进行了收载。基于上述情况,本论文通过现代分析技术,对小叶莲的化学成分进行了系统研究,制定了更加科学合理的小叶莲药材质量标准,为规范药材市场秩序提供指导。本论文对小叶莲的化学成分进行了系统研究,通过色谱分离和重结晶等技术手段,结合质谱、1D/2D-NMR（1H-1H COSY、HSQC、HMBC）等波谱学方法,共计从小叶莲中分离鉴定了 27 个化合物:sinoflavonoid NJ（1）、sinoflavonoid NK（2）、sinoflavonoid NL（3）、山柰酚（4）、山柰素（5）、槲皮素（6）、槲皮素3-甲醚（7）、8-异戊烯基山柰酚（8）、8-异戊烯基槲皮素（9）、6-异戊烯基槲皮素3-甲醚（10）、8-异戊烯基槲皮素3-甲醚（11）、podoverineA（12）、5’-异戊烯基槲皮素3-甲醚（13）、8,2’-二异戊烯基槲皮素3-甲醚（14）、sinoflavonoid B（15）、sinoflavonoid C（16）、sinoflavonoid D（17）、sinoflavonoid K（18）、sinoflavonoid Q（19）、sinoflavonoid Y（20）、sinoflavonoid NA（21）、sinoflavonoid NG（22）、podoverine C（23）、鬼臼毒素（24）、去氧鬼臼毒素（25）、4’-去甲鬼臼毒素（26）、4’-去甲去氧鬼臼毒素（27）。其中化合物1～3为新黄酮类化合物,化合物4、6、8、9、12、24、25和27用于小叶莲指纹图谱研究中共有峰的指认。化合物1、2、3、6、10、11、18、21和23对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌有显著抑制活性,IC50为0.02～1.09 μM。本论文对小叶莲的质量标准进行了研究,共收集到不同产地27批小叶莲药材样品,并对27批小叶莲的水分、灰分、浸出物、薄层色谱鉴别、指纹图谱和含量测定等进行研究。通过考察不同展开体系、不同展开温、湿度和不同品牌薄层板等因素,确定了小叶莲薄层色谱条件:薄层板为Merck g60 F254薄层板,提取方法为甲醇超声提取30分钟,展开系统为环己烷-水饱和正丁醇-甲酸（6.5:2.5:0.8）上层溶液,显色剂为1%的香草醛硫酸溶液。在此条件下,27批供试品在与对照品色谱相对应的位置上显相同颜色的斑点。建立了小叶莲的HPLC指纹图谱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱,柱温为30℃,检测波长为290nm。精密度、重复性、稳定性和延迟性方法学结果良好。结果确定了小叶莲中13个共有峰,并通过化合物比对指认了其中8个共有峰。建立的HPLC指纹图谱能够有效鉴别小叶莲药材。对小叶莲杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属以及浸出物进行了试验考察。规定小叶莲杂质不得过2%;水分不得过11.0%;总灰分不得过8.0%;酸不溶性灰分不得过0.8%;铅不得过5 mg/kg;镉不得过1 mg/kg;砷不得过2mg/kg;汞不得过0.2mg/kg;铜不得过20mg/kg;醇溶性浸出物不得少于25.0%。建立了以鬼臼毒素和去氧鬼臼毒素为检测指标的小叶莲HPLC含量测定方法。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱,柱温为30℃,检测波长为290nm。鬼臼毒素与去氧鬼臼毒素分别在 19.76～316.23 μg/mL（R2=1）和 17.80～284.78μg/mL（R2=0.9998）浓度范围内呈良好的线性关系,检测限分别为42.7和165.4ng/mL,定量限分别为142.3和551.3 ng/mL。平均加样回收率为98.5%和100.4%,RSD分别为2.2%和2.0%（n=9）。方法精密度、重复性和稳定性结果均符合要求。根据研究结果,暂规定小叶莲药材中鬼臼毒素与去氧鬼臼毒素的总量不得少于0.47%。综上,本论文对小叶莲进行了系统的化学成分研究,分离鉴定了 27个化合物,其中包括3个新黄酮类化合物,分离得到的化合物同时用于指纹图谱共有峰的指认和含量测定方法开发;通过建立小叶莲薄层色谱、指纹图谱及含量测定方法,同时考察其杂质、水分、灰分、浸出物和重金属含量,制定了更加科学合理的小叶莲药材质量标准,为规范该药材的市场秩序提供了参考和指导。