银杏( Ginkgo bilobaLinn),为银杏科银杏属落叶高大乔木,是我国特有的古老孑遗植物,为国家二级保护植物,是植物界的“活化石”。银杏提取物含有许多对人类健康有益的活性成分,其中研究和利用最多是黄酮类物质(银杏黄酮的主要成分是槲皮素,山柰酚和异鼠李素)。目前生产银杏黄酮的主要方式是从植株或叶中提取,这难免会导致资源的枯竭,而且生产也会受到很大的限制。近年来研究表明,植物内生菌几乎存在于所有目前已研究过的植物中,分布广,种类多,某些内生菌能产生和其共生植物相同或相似生理活性物质的特点,因此对药用植物内生菌的研究十分活跃。对农业和医药业具有重要的应用潜力。本实验以银杏不同组织部位为材料,研究了其内生菌的种类、组成及其在植物不同器官的分布特点。通过对所得内生菌进行液态培养,用HPLC法筛选得到产银杏黄酮的内生菌株。对产黄酮菌株进行了初步鉴定,并研究其生理生化特征,对其中的高产菌种进行了液态发酵条件的优化。结果如下:1.从银杏的不同部位共分离到内生菌126株,其中细菌71株、真菌49株、放线菌6株;2.有8株菌能产生银杏黄酮,其中7株为真菌,1株为放线菌。鉴定结果分别属于匐柄霉、暗梗梭孢霉属、交链孢属、镰孢霉属、赤霉属、蜜孢霉、暗梗单孢霉属和放线菌属。这些菌株所产银杏黄酮类物质中,异鼠李素的产量较低,槲皮素和山萘酚的产量较高,最高产量可分别达0.851mg/L和0.817mg/L。从各菌株在银杏植株中的分布来看,产山萘酚和异鼠李素的菌株全部来自银杏的根,其它菌株来自茎或叶;3.这8株内生菌进行连续培养,孢内孢外都产黄酮,总黄酮的产量随生长量的增长而增长;4.利用正交设计实验对高产菌株A2进行发酵条件的优化,得优化发酵条件为温度28℃,装液量250mL的三角瓶装80mL,摇床转速180rpm,接种量1环,培养基初始pH值7。优化培养基条件是碳源为葡萄糖,氮源为硝酸铵,生长因子为VC。