论文部分内容阅读
环黄芪醇(CAG)是黄芪中主要皂苷的苷元,可由黄芪甲苷(ASI)制备获得,具有显著的端粒酶激活作用,能通过延缓端粒变短发挥抗衰老作用。文章以黄芪为原料,以环黄芪醇的含量为指标,优化环黄芪醇的制备工艺,获得环黄芪醇提取物。并对该提取物进行成分鉴定及抗衰老活性研究。具体内容如下:1.以环黄芪醇含量为指标,进行了环黄芪醇提取物的制备工艺优化,优化的制备条件为:黄芪粗粉用10倍量pH 12的75%乙醇回流提取2次,每次2小时,粗提物经过大孔树脂处理,依次用纯水、30%乙醇、70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,除去溶剂,获得黄芪甲苷富集物;等量的黄芪甲苷提取物与高碘酸钠在20%的甲醇水溶液中进行氧化反应12小时获得浸膏状中间产物,用等量的硼氢化钠与该中间产物在60%甲醇水溶液中进行还原反应4小时,最后用1 M的硫酸调节溶液pH为1.5-2.0进行酸水解24小时,萃取,除去溶剂。高碘酸裂解的过程中,控制反应温度为35℃。2.对制备获得的环黄芪醇提取物进行了成分鉴定。通过Thermo LTQ Orbitrap XLMT质谱系统,结合文献数据,在正、负离子模式下初步鉴定出该提取物中可能存在的35个化合物,上述研究为该提取物的药理活性研究提供理论依据。3.以H2O2为造模剂成功建立PC12细胞衰老模型,在此基础上,采用MTT法检测环黄芪醇的细胞保护作用,结果显示在试验浓度为0.4μM-2μM的范围内,环黄芪醇表现出了明显的细胞保护作用,证明该细胞衰老模型切实可行,并进一步提示环黄芪醇具有抗衰老活性,与文献报道相符。4.基于上述细胞衰老模型,采用MTT法、衰老相关β-半乳糖苷酶染色法、ELISA法对环黄芪醇提取物的生物活性进行研究。前两种方法的实验结果并不能明确其具有显著的抗衰老作用,而ELISA法的结果显示,该提取物具有明显的端粒酶激活作用。