目的：　　 本研究通过表达纯化人巨细胞病毒编码的白细胞介素-10(cmvIL-10)，分析cmvIL-10对THP-1细胞分泌TNF-α及HLA-DR表达的影响，为进一步研究HCMV潜伏-激活感染机制提供实验依据。　　 方法：　　 1．重组cmvIL-10的诱导表达及纯化　　 分别将重组的cmvIL-10原核表达质粒pMal-c2X-cmvIL-10与人白细胞介素-10(hIL-10)原核表达质粒pMal-c2X-hIL-10（作为实验对照）转化受体菌E.coliBL21(DE3)，经IPTG诱导表达目的蛋白；重组蛋白采用Amylose-resin亲和层析柱进行初步纯化，并用葡聚糖凝胶(SephadexG-75)层析进行二次纯化，经SDS-PAGE电泳鉴定。　　 2．重组cmvIL-10对THP-1细胞分泌TNF-α的影响　　 将不同浓度（2ng/ml、10ng/ml和50ng/ml）的重组cmvIL-10和hIL-10分别与经PHA刺激的THP-1细胞作用48h后，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养细胞上清液TNF-α水平，观察其对THP-1细胞分泌TNF-α的影响。　　 3．重组cmvIL-10对THP-1细胞HLA-DR表达的影响　　 将不同浓度（2ng/ml、10ng/ml和50ng/ml）的重组cmvIL-10和hIL-10分别与THP-1细胞作用48h后，收集THP-1细胞，提取总RNA并逆转录反应，实时荧光定量PCR检测HLA-DRmRNA表达水平；流式细胞术检测THP-1细胞表面HLA-DR分子的表达。　　 结果：　　 1．重组cmvIL-10的诱导表达及纯化　　 用IPTG诱导重组蛋白表达，结果显示0.5mmol/LIPTG在37℃诱导5h能最有效地诱导重组蛋白的表达；重组蛋白经Amylose-resin亲和层析柱初步纯化，并用SephadexG-75进行二次纯化后，经SDS-PAGE电泳鉴定，目的蛋白大小为62.5kDa和62.1kDa，结果与预期吻合。　　 2．重组cmvIL-10对THP-1细胞分泌TNF-α的影响　　 不同浓度（2ng/m1、10ng/ml和50ng/ml）的重组cmvIL-10和hIL-10分别与经PHA刺激的THP-1细胞作用48h后，细胞培养上清液TNF-α的浓度分别为：3.8±0.96pg/ml、1.95±0.51pg/ml、1.6±0.45pg/ml和2.49±0.43pg/ml、1.77±0.38pg/ml、0.98±0.16pg/ml。结果表明，重组cmvIL-10可抑制THP-1细胞分泌TNF-α，随着cmvIL-10浓度的增高，抑制作用增强。　　 3．重组cmvIL-10对THP-1细胞HLA-DRmRNA表达的影响　　 不同浓度（2ng/ml、10ng/ml和50ng/ml）的重组cmvIL-10和hIL-10分别与THP-1细胞作用48h后，THP-1细胞HLA-DRmRNA相对表达量分别为：0.86±0.025、0.76±0.023、0.75±0.017和0.73±0.017、0.61±0.017、0.55±0.015。结果表明，重组cmvIL-10能下调THP-1细胞HLA-DRmRNA的表达，随着cmvIL-10浓度的增高，抑制THP-1细胞HLA-DRmRNA的表达作用增强。　　 4．重组cmvIL-10对THP-1细胞表面HLA-DR分子表达的影响　　 不同浓度（2ng/ml、10ng/ml和50ng/ml）的cmvIL-10和hIL-10重组蛋白分别与THP-1细胞作用48h后，THP-1细胞表面HLA-DR分子相对表达分别为：11.9％、10.8％、9.2％和11.7％、10.5％、8.6％。结果表明，重组cmvIL-10下调THP-1细胞表面HLA-DR分子的表达，随着cmvIL-10浓度的增高，抑制THP-1细胞表面HLA-DR分子的表达作用增强。　　 结论：　　 本实验成功表达并纯化了重组cmvIL-10;重组cmvIL-10可抑制THP-1细胞分泌TNF-α，下调THP-1细胞HLA-DR分子的表达水平，与hIL-10的功能相似。本研究表明克隆的重组蛋白具有免疫抑制作用，为进一步深入HCMV潜伏-激活感染机制提供实验依据。