新辅助化疗（Neoadjuvant chemotherapy,NCT）是针对局部晚期乳腺癌患者的标准治疗。目前的影像学评估在全面性和时效性上存在一定的缺陷。液体活检技术因其无创、实时、全面等特性广泛应用于乳腺癌患者的全程管理,但在乳腺癌新辅助化疗疗效评估中的作用尚待明确。本研究共分为三个部分,分别探讨了循环肿瘤细胞（circulating tumor cell,CTC）、非整倍体循环内皮细胞（circulating endothelial cell,CEC）以及循环游离DNA（cell-free DNA,cf DNA）在乳腺癌新辅助化疗疗效评估中的作用。本研究共纳入61名局部晚期乳腺癌患者,所有患者均经穿刺活检获取病理结果,病理报告包括组织学类型、激素受体、HER-2状态和Ki-67指数。本研究中患者化疗方案为EC×4–T（H）×4 NCT治疗方案（表柔比星90mg/m2 iv d1,环磷酰胺600mg/m2 iv d1,21天为1个周期,共4个周期;多西他赛100 mg/m2iv d1,21天为1个周期,共4个周期）,HER-2阳性患者在第5周期化疗同时联合靶向治疗（曲妥珠单抗初始负荷量8 mg/kg,后续维持量6 mg/kg,21天为1个周期）。采集治疗前（活检时）、化疗的第1和第8个周期后的外周血样本进行检测。根据粗针穿刺活检标本和化疗结束后的手术标本对患者化疗反应进行分组,采用两种不同方式进行:1、Miller-Payne系统;2、Ki-67指数的前后变化,将所有患者分为化疗高反应组和低反应组。第一部分,共45名患者进行了CTC检测。利用SE-i·FISH?系统,本研究评价了CTC总体数量及各亚型在新辅助化疗过程中的变化。结果显示,化疗高反应组患者体内总体CTC、小体积CTC在化疗过程中呈现总体平稳,在化疗低反应组患者体内持续升高,在化疗第8周期结束时,低反应组CTC水平已经明显高于高反应组。8号染色体三倍体、四倍体CTC比例在低反应组中持续升高。总体CTC及各亚型的数量在化疗第8周期结束时具备一定的预测化疗反应的能力。CTC较低的患者无进展生存和总生存明显优于CTC较高的患者。第二部分,共41名患者可获取非整倍体CEC检测数据。在SE-i·FISH?系统检测下,本部分研究正/非整倍体CEC在NCT过程中的水平变化。在NCT过程中,总体CEC呈现先升高后降低的趋势。高反应组非整倍体CEC先升高后降低,低反应组持续升高,二倍体CEC在NCT过程中的变化无统计学差异。本研究中检出Ep CAM+CD31+表型的上皮-内皮融合细胞。NCT过程中,非整倍体CEC和CTC存在明显的正相关。第三部分,共61名患者进行外周血cf DNA检测。采用PCR的方式检测长度为111bp和260bp的DNA分子片段的浓度来评估cf DNA水平,用乳腺癌细胞株SUM-1315中提取的基因组DNA作为对照来评价血浆DNA的完整性。PCR检测结果表明,在高反应组和低反应组之间,3个时间点的cf DNA水平的差异没有统计学意义。同一反应组内不同时间点比较发现,NCT过程中提示凋亡的指标Alu-111bp片段在低反应组中保持相对的稳定,但是在高反应组中Alu-111bp水平却明显上升。Alu-260bp和CFDI在不同化疗反应组间无明显差异。体外实验用乳腺癌细胞株MCF-7和耐药株MCF-7/ADR加入表阿霉素模拟化疗环境,发现细胞上清中的Alu-111bp片段浓度和凋亡存在相关性。