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目的为了提高了姜黄素(Curcumin,Cur)的稳定性,解决姜黄素水溶性差、口服生物利用度低的难题,拟采用前药修饰和纳米制剂技术研制一种新型姜黄素聚合物纳米粒,并对其体外稳定性、水解释放特性及抗肿瘤活性进行考察,从而为开发一种稳定性好且可静脉注射给药的新型姜黄素制剂奠定基础。方法(1)利用优化的油酸(Oleic acid,OA)修饰姜黄素的前药技术合成姜黄素前药—姜黄素-(油酸)2 前药[Curcumin-(Oleic acid)2,Cur(OA)2];通过薄层色谱(TLC)、紫外光谱(UV)、高效液相色谱(HPLC)、核磁共振波谱(NMR)对合成前药物进行表征。并采用改良的溶剂挥发法制备负载Cur(OA)2的聚乙二醇5000-聚乳酸聚乙醇酸嵌段聚合物(Methoxy poly(ethylene-glyeol)poly(lactic-co-glycolic acid)),mPEG5000-PLGA)纳米粒(Nanoparticals,NP)[mPEG5000-PLGA-Cur(OA)2-NP,mPPCO-NP],通过正交实验,以形态、粒径和包封率为指标,系统优化纳米粒制备工艺,并以激光粒度分析仪(Nano-ZS90)和透射电子显微镜(TEM)分别对mPPCO-NP的粒径大小、Zeta电位和形态进行表征,并对载药量(Drug Loading,DL)、包封率(Entrapment Efficiency Rate,EER)等进行测定。(2)同样方法制备姜黄素纳米粒(mPEG5000-PLGA-Cur-NanoParticle,mPPC-NP),并采用紫外-分光光度法对比分析mPPCO-NP的体外稳定性、光敏性进行研究,以评价新型mPPCO-NP的体外稳定性、光敏性;同时,应用紫外-分光光度法研究mPPCO-NP在PBS溶液、健康人体血浆和灭活的健康人体血浆中药物姜黄素的释放行为。(3)应用激光共聚焦显微镜(CLSM)FV1000,以人肝癌细胞株HepG2为模型,以DiI(1,1’-双十八烷-3,3,3’,3’,四甲基吲哚羰花青-高氯酸盐)对mPPCO-NP进行红色荧光标记,得mPPCO-DiI-NP,研究肝细胞对纳米粒mPPCO-DiI-NP的吞噬摄取情况;并采用MTT法评价mPPCO-NP体外对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制活性。结果(1)合成了油酸修饰的姜黄素前药Cur(OA)2,并对其进行结构确证。通过正交设计,筛选出了前药纳米粒mPPCO-NP最佳制备工艺:药物Cur(OA)2与载体mPEG5000-PLGA的用量的比值(m/m)为1:4,有机相与水相溶剂体积比(V/V)为1:2,搅拌速度为1200 r·min-1,泊洛沙姆188(普朗尼克F68)的含量为0.30%。所得纳米粒为球形粒子,分布较均匀,平均粒径为86.23nm;Zeta电位为-23.80mV;包封率为(91.25±0.10)%,载药量为(18.25±0.02)%。(2)mPPCO-NP和mPPC-NP在37℃的生理盐水中均可以缓慢地释放姜黄素,处理1 d后 mPPCO-NP 只释放了 16.68%,而 mPPC-NP 则释放了 60.85%;与 mPPC-NP 在处理9d后释放了 92.42%相比,此时新型mPPCO-NP纳米粒才释放了 29.81%,稳定性得到了极大提高;在生理盐水溶液中与mPPC-NP相比,mPPCO-NP的药物光敏性增强,但避光保存稳定性良好;体外模拟释放试验结果表明mPPCO-NP的药物释放速率持续稳定,但相比mPPC-NP,姜黄素被油酸修饰后释放显著减缓(P<0.01),100h后仍能持续释放药物。(3)mPPCO-NP体外抗肿瘤活性研究表明,所制备的mPPCO-NP对HepG2细胞仍然具有较好的抑制作用,经48 h处理后,其IC50为40.61 μM,但相比姜黄素15.76 μ有所下降,表现为减毒效应。共聚焦结果表明,人肝癌细胞株HepG2可通过内吞作用摄取mPPCO-DiI-NP,并且其内吞噬摄取量随着时间的增加而增加。结论mPPCO-NP呈均匀球形、载药量高,Cur被油酸修饰制成纳米制剂后稳定性明显提高,并有较好的体外抗人肝癌细胞株HepG2增殖活性。纳米粒主要通过吞噬作用进入人肝癌细胞HepG2;上述研究结果为进一步探讨姜黄素纳米粒肝靶向性及姜黄素浓度与体内药效之间关系奠定了良好基础。