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我国是食管癌的高发区,食管癌的发病率居世界首位。近年来,随着手术切除、放射治疗、化学治疗及其它综合性治疗措施的应用,食管癌在治疗效果方面虽然有了一定的进展,但总体来说并不十分理想。因此,进一步探讨食管癌的发病机制,寻求更有效的治疗手段是当前临床研究的热点课题之一。Cripto-1是表皮生长因子(EGF)基因家族成员之一员,是一类糖基磷脂酰基醇(glycosy-1phosphatedylino sitol,GPI)锚定膜蛋白,具备调节细胞大的分化及早期胚胎的发育功能。Cripto-1主要在胚胎早期发育阶段表达,在细胞发生了转化或恶变的时候又重新表达。大量的研究表明,Cripto-1在鼻咽癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤及口腔鳞癌等多种恶性肿瘤过表达,而与肿瘤细胞的分化、增殖、迁徙等密切相关。所以,Cripto-1可能是一种新的肿瘤特异性标志,靶向阻断Cripto-1治疗肿瘤成为当前研究的热点。然而关于Cripto-1在食管癌中可能发挥作用的研究国内外少见文献报道。Cripto-1和食管癌的发生发展是否有相关性,抑制Cripto-1表达对食管癌的发病机制有何影响是本研究需要探讨的核心。本研究采用RNA干扰技术,沉默食管鳞癌EC9706细胞中Cripto-1的表达,采用免疫细胞化学及Western blot检测细胞观察Cripto-1蛋白的表达,采用原位杂交及RT-PCT检查细胞Cripto-1mRNA的表达,采用Boyden chamber检查细胞侵袭力的变化,为寻找食管鳞癌的分子靶向治疗途径提供一定的实验依据及理论基础。材料和方法1.细胞培养：人食管鳞状细胞癌EC9706细胞株在37℃、5%CO2孵育箱中培养。2.选择干扰靶点,设计合成Cripto-1siRNA,以RNAi-Mate转染试剂介导Cripto-1siRNA转染食管鳞癌EC9706细胞,分别转染24、48及72h,同时设立空白对照(无任何处理)组及无关对照组(转染非特异性siRNA)。3.采用免疫细胞化学法及Western blot检测各组Cripto-1蛋白的表达。4.采用原位杂交及RT-PCR检测各组Cripto-1mRNA的表达。5.采用Boyden chamber侵袭小室检测各组细胞的侵袭力。6.统计学处理：所有数据天统计均采用SPSS17.0统计软件,统计学数据用均数士标准差(X±S)表示,两组均数比较用t检验(t-test);多组均数间的比较采用单因素方差分析(one-wav ANOVA),多组均数间的两两比较采用LSD方法,检验水准a=0.05。结果1免疫细胞化学及Western blot结果与各对照组相比,各转染组细胞Cripto-1蛋白的表达均有所降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性和时间依赖性,Cripto-1蛋白的表达随转染浓度的增加及时间的延长而增加,两两比较,转染48h和72h,各组Cripto-1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。2原位杂交及RT-PCR检测结果与各对照组相比,各转染组细胞Cripto-1mRNA的表达均有所降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性和时间依赖性,Cripto-1蛋白的表达随转染浓度的增加及时间的延长而增加,两两比较,转染48h和72h,各组Cripto-1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。3Boyden chamber侵袭小室检测结果各组穿膜细胞数,空白对照组为128.65±6.31,阴性对照组为123.35±15.12,150nM Cripto-1siRNA转染72h后为50.24±6.34,干扰组与各对照组相比,穿膜细胞数有明显减少,且差异有统计学意义(P均<0.05)。结论1.靶向设计的Cripto-1siRNA转染食管鳞癌EC9706细胞后可显著降低Cripto-1-1蛋白和mRNA的表达水平。表明靶向设计的Cripto-1siRNA对Cripto-1有基因沉默作用。2. Cripto-1siRNA可抑制食管癌细胞侵袭能力。