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目的:
温病湿热证是岭南地区温病发病常见的证候类型。目前该证候动物模型的建立尚缺乏统一的客观评价标准,给温病湿热证的动物实验研究造成了一定困难。本研究分别以肠产毒性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)和脂多糖(Lipopolysaccharides ,LPS)为外来致病因子,在“环境+饮食+致病因子”的复合多因素造模原则指导下建立两种温病湿热证小鼠模型并进行对比,比较不同致病因素所造模型在症状、炎症因子等方面的差别,并在发掘这两种模型肠道菌群动态变化规律的基础上寻求具有模型评价潜力的特征菌属。
方法:
通过文献复习阐明温病湿热证与肠道菌群的密切联系并开展动物实验研究,将52只BALB/c小鼠随机分为6组,即正常组(A1)、正常环境+ETEC组(A2)、正常环境+LPS组(A3)、湿热环境组(B1)、湿热环境+ETEC组(B2)、湿热环境+LPS组(B3)。B1、B2、B3组置于人工气候箱(温度30.5℃~31.5℃,湿度85%~95%),每日连续10小时,饲喂高脂饲料,自由摄食及饮用20%蔗糖溶液,连续造模20天。造模第20天,A2、B2组小鼠予灌胃感染ETEC,A3、B3组小鼠予腹腔注射LPS。观察并记录各组小鼠的体温、体重、进食量、饮水量、精神状态、活动度、被毛、爪、尾、肛门情况、大小便性状等症状、体征变化,收集9个时间点的粪便并检测粪便中大肠杆菌属、拟杆菌属、肠球菌属、梭菌属的含量,取材后检查结肠病理,实时荧光定量PCR法检测结肠TNF-α、IL-6水平,运用SPSS26.0和GraphPadPrism8.0软件进行统计分析和作图。
结果:
在模型成立方面,A2、A3组给予ETEC、LPS后可在短时间内表现出相关湿热症状和体征,但未达到现有诊断标准;B1组小鼠湿热症状不明显;B2、B3组小鼠出现粪便湿软或黏液便、肛门红肿充血等类似临床湿热证表现,可认为基本建立了温病湿热证模型。在结肠病理方面,除A1组外,其余组别小鼠结肠病理均有炎症表现,以A2组结肠病理变化最小;在炎症指标检测方面,与A组及B1组相比,B2、B3组TNF-α水平升高(P<0.01),B3组TNF-α水平高于B2组(P<0.01)。与A1、B1组相比,B2、B3组IL-6水平升高(P<0.05),其余组间IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05)。在肠道菌群检测方面,与A1组相比,B2、B3组在模型成立前大肠杆菌属和拟杆菌属、成立时肠球菌属呈特征性增多(P<0.05),B1组“湿阻证模型”以肠球菌属增多为主,后期“热”证表现时梭菌属增多(P<0.05)。
结论:
单一的外来病邪因素或仅靠“饮食+环境”因素造模都不能复制出完整的温病湿热证动物模型。在复合多因素造模原则的指导下,使用ETEC或LPS作为外来致病因子均可建模成功。大肠杆菌属、拟杆菌属、肠球菌属在温病湿热证模型客观评价指标的发掘上具有广阔前景,其中,大肠杆菌属、拟杆菌属可能可用于温病湿热证的早期辅助诊断,肠球菌属、梭菌属可能分别是“湿”、“热”的特征菌属。
温病湿热证是岭南地区温病发病常见的证候类型。目前该证候动物模型的建立尚缺乏统一的客观评价标准,给温病湿热证的动物实验研究造成了一定困难。本研究分别以肠产毒性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)和脂多糖(Lipopolysaccharides ,LPS)为外来致病因子,在“环境+饮食+致病因子”的复合多因素造模原则指导下建立两种温病湿热证小鼠模型并进行对比,比较不同致病因素所造模型在症状、炎症因子等方面的差别,并在发掘这两种模型肠道菌群动态变化规律的基础上寻求具有模型评价潜力的特征菌属。
方法:
通过文献复习阐明温病湿热证与肠道菌群的密切联系并开展动物实验研究,将52只BALB/c小鼠随机分为6组,即正常组(A1)、正常环境+ETEC组(A2)、正常环境+LPS组(A3)、湿热环境组(B1)、湿热环境+ETEC组(B2)、湿热环境+LPS组(B3)。B1、B2、B3组置于人工气候箱(温度30.5℃~31.5℃,湿度85%~95%),每日连续10小时,饲喂高脂饲料,自由摄食及饮用20%蔗糖溶液,连续造模20天。造模第20天,A2、B2组小鼠予灌胃感染ETEC,A3、B3组小鼠予腹腔注射LPS。观察并记录各组小鼠的体温、体重、进食量、饮水量、精神状态、活动度、被毛、爪、尾、肛门情况、大小便性状等症状、体征变化,收集9个时间点的粪便并检测粪便中大肠杆菌属、拟杆菌属、肠球菌属、梭菌属的含量,取材后检查结肠病理,实时荧光定量PCR法检测结肠TNF-α、IL-6水平,运用SPSS26.0和GraphPadPrism8.0软件进行统计分析和作图。
结果:
在模型成立方面,A2、A3组给予ETEC、LPS后可在短时间内表现出相关湿热症状和体征,但未达到现有诊断标准;B1组小鼠湿热症状不明显;B2、B3组小鼠出现粪便湿软或黏液便、肛门红肿充血等类似临床湿热证表现,可认为基本建立了温病湿热证模型。在结肠病理方面,除A1组外,其余组别小鼠结肠病理均有炎症表现,以A2组结肠病理变化最小;在炎症指标检测方面,与A组及B1组相比,B2、B3组TNF-α水平升高(P<0.01),B3组TNF-α水平高于B2组(P<0.01)。与A1、B1组相比,B2、B3组IL-6水平升高(P<0.05),其余组间IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05)。在肠道菌群检测方面,与A1组相比,B2、B3组在模型成立前大肠杆菌属和拟杆菌属、成立时肠球菌属呈特征性增多(P<0.05),B1组“湿阻证模型”以肠球菌属增多为主,后期“热”证表现时梭菌属增多(P<0.05)。
结论:
单一的外来病邪因素或仅靠“饮食+环境”因素造模都不能复制出完整的温病湿热证动物模型。在复合多因素造模原则的指导下,使用ETEC或LPS作为外来致病因子均可建模成功。大肠杆菌属、拟杆菌属、肠球菌属在温病湿热证模型客观评价指标的发掘上具有广阔前景,其中,大肠杆菌属、拟杆菌属可能可用于温病湿热证的早期辅助诊断,肠球菌属、梭菌属可能分别是“湿”、“热”的特征菌属。