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糖尿病及其并发症，严重威胁人类健康和社会经济发展。糖尿病患病人数、糖尿病并发症的死亡率逐年递增。改善糖尿病糖脂紊乱，缓解糖尿病症状，延长糖尿病生存时间，阻止糖尿病的病情进展成为亟待解决的问题。众所周知，糖尿病尤其是2型糖尿病病理机制是胰岛素抵抗和胰岛细胞的损伤。胰岛细胞损伤的机制包括有氧化应激，内质网应激，炎症反应，线粒体功能失调，晚期糖基化终末产物，O-GlcNAc修饰，低氧状态，胰岛β细胞分化表型的丧失。高脂高糖是诱发胰岛细胞损伤的关键因素。
借助GEO数据库，下载6个2型糖尿病患者提供的胰腺转录组基因检测数据集。利用R语言和edge等软件包进行转录组数据整合和归一化处理以及差异性统计分析，筛选出74个差异基因。利用DAVID，对差异基因进行功能和通路富集分析，以解释糖尿病胰岛损伤的机制。经过GO和KEGG富集分析。发现内质网应激和自噬现象是胰岛细胞结构和功能调节的重要机制。
前人实验探索了，这两种表型的发生发展过程，信号转导途径以及上下游关键分子。
降糖三黄片在临床上积累了丰厚的经验。原方加味桃核承气汤来源于中医经典《伤寒论》，有雄厚的理论基础。在降糖方面有自己的独到之处，其泻热通腑，活血散结，益气养阴的作用使其降糖效果显著。
目的：
为研究高脂高糖诱导的胰岛细胞损伤中，内质网应激和自噬各自的变化以及二者的关系。探索降糖三黄片对胰岛细胞的保护作用，深入挖掘作用机制。
方法：
本研究立足于胰岛细胞生理病理机制，建立糖脂毒性模型，模拟2型糖尿病高脂高糖状态，分别进行体内体外实验。借助转录组数据库以及现代检测工具，探究糖脂毒性对胰岛细胞的损伤机制。评估降糖三黄片整体降糖效果并探究其降糖机制。
体内实验：以db/db小鼠为2型糖尿病模型，在其血糖达标成模之后。分为四组：模型组，降糖三黄片高剂量组，降糖三黄片低剂量组，二甲双胍阳性对照组，以c57小鼠为正常组。干预8周。实验过程中，4周一次测量其体重，饮水，空腹尾尖血糖。8周结束后，测量其OGTT，检测血清糖脂代谢相关生化指标：FINS,TG,CHOL,FFA。光镜下观察胰腺组织及胰岛细胞形态的HE染色切片，观察内质网应激关键蛋白GRP78的染色。电镜观察胰腺组织超微结构，观察自噬小体。
体外实验：首先通过SD大鼠灌胃降糖三黄片，获取中药含药血清。接着以MIN6细胞为研究对象，利用cck8试剂盒筛选合适的糖脂环境。建立MIN6糖脂毒模型。分组为正常组(Ctrl)，高脂高糖组(HH)，降糖三黄片含药血清组(HH+JT)，抑制剂组(HH+JT+SP600125)。利用流式细胞术检测凋亡水平，利用RtqPCR和Westernblot，检测自噬相关分子Beclin，Lc3Ⅱ/Ⅰ和内质网应激相关分子JNK，GRP78，CHOP的基因和蛋白。
结果：
利用生物信息技术发现内质网应激是胰岛细胞损伤的关键机制。
体内实验
实验过程中，正常组C57小鼠与db/db小鼠相比，精神状态良好，活泼好动，动作敏捷，反应灵敏，毛色鲜亮有光泽。Db/db小鼠精神状态一般，疲懒萎顿，毛色油腻，个别甚至出现腹部皮肤溃烂，溃烂年后伤口难以愈合。均出现“三多”的症状，即多饮多食多尿。
体重方面：干预4周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组体重明显升高。中药高剂量组体重明显低于模型组。干预8周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组体重明显升高。中药高剂量组明显体重低于模型组。
空腹血糖：干预4周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组FBG明显高于正常组。阳性对照药组FBG明显低于模型组。干预8周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组FBG高于正常组。中药高低剂量组以及西药组FBG明显低于模型组。
饮水：干预4周或8周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组饮水量明显增加。
OGTT曲线下面积：模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组AUC面积明显高于正常组。中药低剂量组和阳性对照组AUC明显高于模型组。
空腹胰岛素：模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组FINS明显高于正常组。中药高低剂量组与阳性对照组较模型组FINS明显降低。中药低剂量组FINS明显高于模型组。中药高剂量组FINS明显低于中药低剂量组。
空腹血脂：模型组、中药低剂量组以及阳性对照组较正常组TG明显升高。中药高剂量组较模型组TG明显降低。模型组、中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组CHOL明显升高。模型组、中药低剂量组较正常组FFA明显升高。中药高剂量组和阳性对照组较模型组FFA明显降低。
光镜下，正常组小鼠胰腺组织，胰岛细胞团数量较多，形态规则，呈圆形或卵圆形。边缘清晰，排列规则，胞浆淡染呈白色或浅粉红色，胞质丰富，胞核清晰呈卵圆形、深染。腺管结构清晰。模型组小鼠，胰岛数量减少，分布稀疏且不均匀。胰岛细胞中度到重度肿胀、空泡变性，局部细胞溶解坏死，细胞排序不齐，形状不规则，胞质边界不清，核淡染。腺管结构不清晰。西药组小鼠，胰岛数量减少较轻，胰岛萎缩，边缘较清晰，排列较规则，胞浆淡染呈白色或浅粉红色，胞质较丰富，胞核较清晰呈卵圆形、较深染。腺管结构较清晰。中药两组相差不多，胰岛数量稍减少，部分胰岛细胞稍萎缩，部分细胞肿胀、空泡变性。细胞较排序不齐，形状稍不规则，胞质边界稍不清，核淡染。腺管结构稍不清晰。
透射电镜观察，与c57小鼠相比，模型组胰岛细胞数量少，分泌颗粒少，线粒体肿胀多，线粒体峭断裂或消融，内质网扩张，髓鞘样小体形成。细胞内双层膜结构的自噬小体较多。内含各种多余或衰老的细胞器等。与模型组小鼠比较，西药组小鼠胰岛细胞数量在正常组与模型组之间，超微结构损伤较少。分泌颗粒较多，线粒体稍肿胀，线粒体内发现自噬小体。细胞质内可见溶酶体以及未降解的自噬泡。中药高低计量组小鼠胰岛细胞数量尚可，两组电镜下超微结构相差不大，胰岛细胞部分损伤。分泌颗粒一般，线粒体部分肿胀，线粒体内发现很多自噬小体。细胞质内可见溶未降解的自噬泡以及自噬空泡。
免疫组化IOD值没有统计学差异。
体外实验
凋亡率：正常组凋亡率明显低于其他三组。模型组明显高于其他两组。中药组明显低于抑制剂组。
PCR结果：模型组GRP78mRNA含量明显高于正常组。抑制剂组明显低于模型组。CHOPmRNA相对表达量：模型组、中药组、抑制剂组较正常组CHOPmRNA相对表达量明显升高；中药组和抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。Beclin1mRNA相对表达量，模型组和中药组较正常组Beclin1mRNA相对表达量明显升高。JNKmRNA相对表达量：抑制剂组较正常组JNKmRNA相对表达量明显降低。LC3mRNA相对表达量：抑制剂组较正常组表达量明显降低。中药组较正常组，表达量明显下降。
Westernblot：GRP78相对表达量：模型组、中药组、抑制剂组较正常组明显升高。中药组和抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显下降。CHOP相对表达量：模型组、中药组、抑制剂表达明显高于正常组。制剂组明显低于中药组。Lc3Ⅱ/Ⅰ相对表达量；模型组和抑制剂组较正常组明显升高。中药组和抑制剂组较模型组明显降低，抑制剂组较中药组明显升高。Beclin1相对表达量：模型组和中药组较正常组明显升高。中药组较模型组明显升高，抑制剂组较模型组明显降低。中药组与抑制剂组相比，抑制剂组较中药组明显降低。pJNK相对表达量：中药组和模型明显升高，抑制剂组明显降低。抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。JNK相对表达量：模型组和中药组明显升高，抑制剂组明显降低。中药组较模型组明显升高，抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。pJNK/JNK相对表达量：模型组和中药组明显升高，抑制剂组明显降低。中药组较模型组明显升高，抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。
结论：
降糖三黄片在调节糖脂紊乱、在保护胰岛方面有一定疗效但是效果不如二甲双胍。
体外实验
糖脂毒性诱发胰岛细胞MIN6凋亡及损伤，损伤机制在于引起自噬、内质网应激的未折叠蛋白过度。
通过JNK抑制剂，抑制内质网应激，我们发现自噬启动相关基因升高，由此得出内质网应激与自噬的关系。内质网应激可以一定程度上启动自噬。
降糖三黄片对糖脂毒性损伤的胰岛细胞有一定保护作用。其作用机制在于改善细胞内质网应激和自噬的调节功能。
JNK抑制剂与降糖三黄片合用改善胰岛细胞的作用最强，为未来降糖药物的研究提供了良好的思路。
借助GEO数据库，下载6个2型糖尿病患者提供的胰腺转录组基因检测数据集。利用R语言和edge等软件包进行转录组数据整合和归一化处理以及差异性统计分析，筛选出74个差异基因。利用DAVID，对差异基因进行功能和通路富集分析，以解释糖尿病胰岛损伤的机制。经过GO和KEGG富集分析。发现内质网应激和自噬现象是胰岛细胞结构和功能调节的重要机制。
前人实验探索了，这两种表型的发生发展过程，信号转导途径以及上下游关键分子。
降糖三黄片在临床上积累了丰厚的经验。原方加味桃核承气汤来源于中医经典《伤寒论》，有雄厚的理论基础。在降糖方面有自己的独到之处，其泻热通腑，活血散结，益气养阴的作用使其降糖效果显著。
目的：
为研究高脂高糖诱导的胰岛细胞损伤中，内质网应激和自噬各自的变化以及二者的关系。探索降糖三黄片对胰岛细胞的保护作用，深入挖掘作用机制。
方法：
本研究立足于胰岛细胞生理病理机制，建立糖脂毒性模型，模拟2型糖尿病高脂高糖状态，分别进行体内体外实验。借助转录组数据库以及现代检测工具，探究糖脂毒性对胰岛细胞的损伤机制。评估降糖三黄片整体降糖效果并探究其降糖机制。
体内实验：以db/db小鼠为2型糖尿病模型，在其血糖达标成模之后。分为四组：模型组，降糖三黄片高剂量组，降糖三黄片低剂量组，二甲双胍阳性对照组，以c57小鼠为正常组。干预8周。实验过程中，4周一次测量其体重，饮水，空腹尾尖血糖。8周结束后，测量其OGTT，检测血清糖脂代谢相关生化指标：FINS,TG,CHOL,FFA。光镜下观察胰腺组织及胰岛细胞形态的HE染色切片，观察内质网应激关键蛋白GRP78的染色。电镜观察胰腺组织超微结构，观察自噬小体。
体外实验：首先通过SD大鼠灌胃降糖三黄片，获取中药含药血清。接着以MIN6细胞为研究对象，利用cck8试剂盒筛选合适的糖脂环境。建立MIN6糖脂毒模型。分组为正常组(Ctrl)，高脂高糖组(HH)，降糖三黄片含药血清组(HH+JT)，抑制剂组(HH+JT+SP600125)。利用流式细胞术检测凋亡水平，利用RtqPCR和Westernblot，检测自噬相关分子Beclin，Lc3Ⅱ/Ⅰ和内质网应激相关分子JNK，GRP78，CHOP的基因和蛋白。
结果：
利用生物信息技术发现内质网应激是胰岛细胞损伤的关键机制。
体内实验
实验过程中，正常组C57小鼠与db/db小鼠相比，精神状态良好，活泼好动，动作敏捷，反应灵敏，毛色鲜亮有光泽。Db/db小鼠精神状态一般，疲懒萎顿，毛色油腻，个别甚至出现腹部皮肤溃烂，溃烂年后伤口难以愈合。均出现“三多”的症状，即多饮多食多尿。
体重方面：干预4周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组体重明显升高。中药高剂量组体重明显低于模型组。干预8周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组体重明显升高。中药高剂量组明显体重低于模型组。
空腹血糖：干预4周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组FBG明显高于正常组。阳性对照药组FBG明显低于模型组。干预8周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组FBG高于正常组。中药高低剂量组以及西药组FBG明显低于模型组。
饮水：干预4周或8周时，模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组饮水量明显增加。
OGTT曲线下面积：模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组AUC面积明显高于正常组。中药低剂量组和阳性对照组AUC明显高于模型组。
空腹胰岛素：模型组，中药高低剂量组以及阳性对照组FINS明显高于正常组。中药高低剂量组与阳性对照组较模型组FINS明显降低。中药低剂量组FINS明显高于模型组。中药高剂量组FINS明显低于中药低剂量组。
空腹血脂：模型组、中药低剂量组以及阳性对照组较正常组TG明显升高。中药高剂量组较模型组TG明显降低。模型组、中药高低剂量组以及阳性对照组较正常组CHOL明显升高。模型组、中药低剂量组较正常组FFA明显升高。中药高剂量组和阳性对照组较模型组FFA明显降低。
光镜下，正常组小鼠胰腺组织，胰岛细胞团数量较多，形态规则，呈圆形或卵圆形。边缘清晰，排列规则，胞浆淡染呈白色或浅粉红色，胞质丰富，胞核清晰呈卵圆形、深染。腺管结构清晰。模型组小鼠，胰岛数量减少，分布稀疏且不均匀。胰岛细胞中度到重度肿胀、空泡变性，局部细胞溶解坏死，细胞排序不齐，形状不规则，胞质边界不清，核淡染。腺管结构不清晰。西药组小鼠，胰岛数量减少较轻，胰岛萎缩，边缘较清晰，排列较规则，胞浆淡染呈白色或浅粉红色，胞质较丰富，胞核较清晰呈卵圆形、较深染。腺管结构较清晰。中药两组相差不多，胰岛数量稍减少，部分胰岛细胞稍萎缩，部分细胞肿胀、空泡变性。细胞较排序不齐，形状稍不规则，胞质边界稍不清，核淡染。腺管结构稍不清晰。
透射电镜观察，与c57小鼠相比，模型组胰岛细胞数量少，分泌颗粒少，线粒体肿胀多，线粒体峭断裂或消融，内质网扩张，髓鞘样小体形成。细胞内双层膜结构的自噬小体较多。内含各种多余或衰老的细胞器等。与模型组小鼠比较，西药组小鼠胰岛细胞数量在正常组与模型组之间，超微结构损伤较少。分泌颗粒较多，线粒体稍肿胀，线粒体内发现自噬小体。细胞质内可见溶酶体以及未降解的自噬泡。中药高低计量组小鼠胰岛细胞数量尚可，两组电镜下超微结构相差不大，胰岛细胞部分损伤。分泌颗粒一般，线粒体部分肿胀，线粒体内发现很多自噬小体。细胞质内可见溶未降解的自噬泡以及自噬空泡。
免疫组化IOD值没有统计学差异。
体外实验
凋亡率：正常组凋亡率明显低于其他三组。模型组明显高于其他两组。中药组明显低于抑制剂组。
PCR结果：模型组GRP78mRNA含量明显高于正常组。抑制剂组明显低于模型组。CHOPmRNA相对表达量：模型组、中药组、抑制剂组较正常组CHOPmRNA相对表达量明显升高；中药组和抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。Beclin1mRNA相对表达量，模型组和中药组较正常组Beclin1mRNA相对表达量明显升高。JNKmRNA相对表达量：抑制剂组较正常组JNKmRNA相对表达量明显降低。LC3mRNA相对表达量：抑制剂组较正常组表达量明显降低。中药组较正常组，表达量明显下降。
Westernblot：GRP78相对表达量：模型组、中药组、抑制剂组较正常组明显升高。中药组和抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显下降。CHOP相对表达量：模型组、中药组、抑制剂表达明显高于正常组。制剂组明显低于中药组。Lc3Ⅱ/Ⅰ相对表达量；模型组和抑制剂组较正常组明显升高。中药组和抑制剂组较模型组明显降低，抑制剂组较中药组明显升高。Beclin1相对表达量：模型组和中药组较正常组明显升高。中药组较模型组明显升高，抑制剂组较模型组明显降低。中药组与抑制剂组相比，抑制剂组较中药组明显降低。pJNK相对表达量：中药组和模型明显升高，抑制剂组明显降低。抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。JNK相对表达量：模型组和中药组明显升高，抑制剂组明显降低。中药组较模型组明显升高，抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。pJNK/JNK相对表达量：模型组和中药组明显升高，抑制剂组明显降低。中药组较模型组明显升高，抑制剂组较模型组明显降低。抑制剂组较中药组明显降低。
结论：
降糖三黄片在调节糖脂紊乱、在保护胰岛方面有一定疗效但是效果不如二甲双胍。
体外实验
糖脂毒性诱发胰岛细胞MIN6凋亡及损伤，损伤机制在于引起自噬、内质网应激的未折叠蛋白过度。
通过JNK抑制剂，抑制内质网应激，我们发现自噬启动相关基因升高，由此得出内质网应激与自噬的关系。内质网应激可以一定程度上启动自噬。
降糖三黄片对糖脂毒性损伤的胰岛细胞有一定保护作用。其作用机制在于改善细胞内质网应激和自噬的调节功能。
JNK抑制剂与降糖三黄片合用改善胰岛细胞的作用最强，为未来降糖药物的研究提供了良好的思路。