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目的:体外实验研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对兔晶体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells,RLECs)增殖的影响。
方法:组织块贴壁法原代培养RLECs,采用第3代细胞。MTT法测不同浓度RAPA(0.1 ng/ml、10 ng/ml)在不同时间(48h、72h)对RLECs增殖的影响,Western blotting法检测增殖细胞核(Proliferating Cell NuclearAntigen,PCNA)表达的变化。HE染色观察RAPA对RLECs的影响。
结果:组织块接种24h即可见细胞生长,且保持上皮细胞形态。传代至第5代后RLECs明显变成成纤维细胞形状。MTT法示RAPA对RLECs的增殖抑制率分别为1.16%(0.1 ng/ml/48h组,P>0.05),15.52%(0.1 ng/ml/72h组,P<0.01),12.57%(10 ng/ml/48h组,P<0.01)和50.13%(10 ng/ml/72h组,P<0.01)。HE染色示随着PAPA浓度增加和作用时间延长,出现RLECs体积增加、核仁消失、胞浆内空泡增多等改变。PCNA的表达分别为1.08±0.08(对照组),0.85±0.05(0.1 ng/ml/24h组),0.70±0.03(0.1 ng/ml/48h组),0.64±0.07(10 ng/ml/24h组)和0.44±0.06(10 ng/ml/48h组),示RAPA处理组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
结论:RAPA可以有效地抑制培养的RLECs增殖,并具剂量和时间依赖性,其可能机制为阻止了细胞周期的进程。