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国内外研究发现,Sp110基因参与机体的特异性免疫应答和抗病毒反应,是与人体肺结核病易患性相关的一个候选基因,在细胞中具有转录激活因子的作用。该基因在人上研究较多,尚未见有关猪Sp110基因的研究报告,本研究以猪Sp110基因为研究对象,利用克隆测序等分子生物学方法克隆猪Sp110基因c DNA序列及其变异剪接体;采用Minigene技术深入分析其变异剪接情况;采用脂质体介导的转染方法对猪Sp110基因进行亚细胞定位分析;并利用Real time PCR方法检测猪Sp110基因的组织表达和诱导表达情况。本试验研究结果如下:(1)首次成功克隆了猪Sp110基因cDNA序列,获得27条变异剪接体(Gen Bank accession Nos.KC811303-27、KF898045、JX280458),其中变异剪接体V26最长,我们将其作为reference(R)序列,相对于R,其他变异剪接体都是序列缺失形成的。R扩增全长2016 bp,含有11bp 5’-非翻译区(Untranslated region,UTR)、1950 bp CDS区和55 bp 3’-UTR,预期编码649个氨基酸。与R相比,V、V1、V5、V6、V9、V14、V20和V22为缺失突变;其余均为移码突变,导致翻译提前终止。(2)利用外显子3、14和15构建Minigene载体,在该区域内寻找到7种新的变异剪接方式(NV1-7),NV1/5/6均由外显子3和15的部分序列组成,但剪接位点(Splice sites,SSs)各不相同;NV2由完整的外显子3和15组成;NV3和NV4由外显子3、14和15组成,其中NV4含有完整的外显子14,而NV3的外显子14缺失17 bp;NV7由NV2的5’端和NV1的3’端组成,中间含有15 bp的内含子14序列。(3)亚细胞定位分析结果显示只有变异剪接体R和V定位在细胞核内,其他变异剪接体丧失了核定位能力;进一步对截短突变体分析,表明核定位序列(Nuclear localization sequence,NLS)位于变异剪接体R的250-280 aa处;生物信息学分析发现254-279 aa(KKGKKKKRCIWATPKRRHKKKCLPRE)为NLS。(4)RT-qPCR表明变异剪接体R和V存在着相似的组织表达谱:均普遍表达于所检测的各组织中,其中脾脏组织中表达量最高;在Poly(I:C)的刺激下其表达量都增加且反应相似;此外,二者具有相似的半衰期。但竞争性RT-PCR分析表明,在各组织中R的表达量均高于V。这些结果表明,变异剪接体R和V具有相似的活性,R是猪Sp110的主要活性形式。