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由小麦叶锈菌(Puccinia triticina)引起的小麦叶锈病是影响世界小麦稳产高产的重要病害之一,也是影响我国小麦生产的重要因素。持续筛选抗病基因和培育抗病品种是防治小麦叶锈病发生的主要手段。小麦抗叶锈病基因Lr35最初来源于拟斯卑尔脱山羊草(Aegilops speltoides),通过与Triticina.monococcum的二倍体回交将其转移到小麦品种马奎斯(Marquis)中。该基因位于2B染色体上,与Sr39紧密连锁。其抗性在二叶期开始表达,六叶期完全表达,是一个应用潜力很大的由主效基因控制的抗病基因。抗病基因类似序列(Reistance gene analogys,RGAs)技术是利用抗病基因具有保守结构域的特性,通过人工合成引物对基因组DNA进行定点扩增,在全基因组水平上检测DNA变异。本试验以含小麦抗叶锈病基因Lr35的近等基因系材料TcLr35和感病亲本Thatcher以及其它小麦抗叶锈病近等基因系材料进行RGA分析。主要结果如下:根据已克隆的植物抗病基因普遍具有的NBS和LRR结构域设计49条RGA引物,组成260对引物组合,从近等基因系TcLr35中扩增获得4条特异性片段。其中引物对Pto-kin1IN/XLRR-INV1从近等基因系TcLr35中扩增获得一条747bp的稳定特异性片段。以本实验室保存的49个小麦抗叶锈病近等基因系材料进行扩增,发现此条带仅在TcLr35中存在,而在其他48个小麦抗叶锈病近等基因系材料及感病亲本Thatcher中均未出现,说明该片段特异性很强。对该特异性片段进行序列测定与分析,经BLAST比较,表明该片段与许多已克隆出来的小麦基因序列相似:与Triticummonococcum DV92的BAC克隆231A16有84%的同源性,与Triticum urartu clone BAC210J24有96%同源性;与Triticum turgidum subsp.durum clone BAC 221H19有90%同源性;与Triticum urartu clone BAC 41C8有89%同源性;与Triticum urartu clone BAC292N12有88%同源性等。对该特异性片段进行蛋白质序列比对,未发现与其于已知功能小麦片段有较高同源性。