绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneianoniae,MO）是引起羊传染性胸膜肺炎的主要病原,该病是一种高传染性和高发病率的慢性呼吸道疾病,已在我国多个省份的羊群中分离到该病原,对羊养殖业造成巨大的经济损失。目前用于预防该病的商品化疫苗较少,常用的全菌灭活疫苗免疫保护期较短,亚单位疫苗成为支原体疫苗的研究热点。本试验运用免疫组学技术对MO IK3-3株的免疫原性蛋白进行了筛选,为绵羊肺炎支原体新型疫苗的研制提供思路。本研究通过免疫组学技术初步分离鉴定MO相关免疫蛋白,并进一步验证其免疫功能。首先建立了MO全菌蛋白的蛋白组学技术平台。成功提取了绵羊肺炎支原体IK3-3株全菌蛋白,经2D Clean-up Kit处理后,利用双向电泳技术（Two-dimensional Electrophoresis,2-DE）成功进行了蛋白组分的分离,得到了高重复性的电泳图谱,为后续MO蛋白组学的研究奠定了良好基础。在重复凝胶中检测到平均96个蛋白点,将蛋白凝胶转印后与绵羊肺炎支原体IK3-3康复血清进行Western-blot,并将MO IK3-3株双向电泳图谱与Western-blot图谱进行比对,筛选免疫原性蛋白点。通过MALDI-TOF飞行时间质谱对免疫原性较强的蛋白点进行鉴定,得到了免疫相关蛋白的氨基酸序列,并从MO IK3-3株基因序列中匹配对应蛋白的编码序列。成功鉴定全部6个蛋白点,其中2个为酶类,为MO免疫相关蛋白的后续研究奠定了基础。随后对优选出的EF-Tu蛋白进行密码子优化与全基因合成,将重组基因插入到表达载体p Czn1中,经诱导表达得到分子量为45.4 k Da的融合蛋白。将纯化后目的蛋白与绵羊肺炎支原体高免血清及康复血清进行了Western-blot试验,结果显示两者有强烈的免疫反应,EF-Tu蛋白具有良好的免疫原性,充分印证之前MO全菌蛋白双向电泳凝胶的Western-blot结果。最后建立了基于EF-Tu重组蛋白的间接ELISA检测方法,特异性与敏感性良好,在与市场上绵羊肺炎支原体间接血凝试剂盒同时对临床样品的检测中,其符合率达到77.5%,为绵羊支原体肺炎的研究与防治进一步研究奠定了基础。