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目的：
巨噬细胞(Macrophages,Mφ)属于固有免疫细胞，其广泛存在于男性的精液中。在一般生理状态下，精液中的Mφ处于免疫抑制状态。当男性生殖系统出现病变时，精液中的Mφ会大量增加，其免疫功能被激活。本研究旨在分析精液中的Mφ浓度、活性、亚型，Mφ与精子的质量参数、活性氧类物质(Reactive oxygen species, ROS)、细胞因子(Cytokine, CK)间的相关性，为男性不育的病因分析提供实验数据。
方法：
1.收集2018-2019年就诊于我院生殖中心的男性精液标本共78份，采用巴氏染色法进行精液染色，观察精液中巨噬细胞的形态。
2.采用流式细胞术检测精液中Mφ及其主要亚型(M1、M2)的浓度。根据精液中Mφ的浓度将样本分为低浓度组(A组：Mφ<6×105/ml)和高浓度组(B组：Mφ>6×105/ml)。
3.分析两组患者的年龄、禁欲时间、体重指数(BMI)、原发性不育百分率等影响精液质量的相关因素间的差异。分析两组精液的体积、液化时间、粘稠度、PH值等相关理化参数间的差异。
4.采用手工法检测样本的精子动力学参数；采用巴氏染色法检测其精子形态学参数；采用染色质扩散(SCD)法检测其精子DNA碎片指数(DFI)；采用伊红苯胺黑染色法检测其精子细胞膜的完整性；采用混合凝集(MAR)法检测其精子细胞膜表面抗精子抗体(AsAb)的阳性率。分析两组样本的精子质量参数间的差异。
5.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测精液中的白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-12(IL-12)的浓度，分析两组间IL-10和IL-12浓度的差异及其Mφ的浓度与IL-10、IL-12浓度间的相关性。
6.采用全自动精浆生化免疫分析仪检测精液中ROS的浓度，分析两组间ROS浓度的差异及其Mφ的浓度与ROS浓度间的相关性。
7.分析精液中的Mφ浓度与精子质量参数间的相关性。
8.统计学方法：组间比较采用独立样本t检验和连续校正卡方检验，相关性分析采用Pearson分析。
结果：
1.精液中Mφ的检出情况：大部分精液中可检出少许在形态上与标准巨噬细胞株相似的圆形细胞。
2.Mφ的浓度分析：在78例精液Mφ浓度的检测中，Mφ<6×105/ml的样本(A组)共计34例，其浓度范围为0-5.30×105/ml，其均值为2.17±1.76×105/ml。Mφ>6×105/ml的样本(B组)共计44例，其浓度范围为6.10-15.50×105/ml，其均值为9.45±2.47×105/ml。两组精液中的Mφ均未分型。
3.患者情况及精液的理化指标：两组间的患者年龄、禁欲时间、BMI指数、原发性不育百分率、两组间的精液体积、液化时间、PH值、粘稠度等理化参数的差异均无统计学意义(P>0.05)。
4.两组精子质量相关参数比较：两组间的精子浓度和精子非前向运动百分率(NP%)的差异均无统计学意义(P＞0.05)。A组的精子前向运动百分率(PR%)较B组高、精子不活动率(IM%)较B组低，其差异均有统计学意义(P=0.00，P=0.00)。A组的精子正常形态率较B组高(P=0.00)；A组的精子头部畸形率、颈部和中段畸形率、精子畸形指数(SDI)、畸形精子指数(TZI)均较B组低，其差异均有统计学意义(P=0.00，P=0.01，P=0.00，P=0.01)；两组的精子主段畸形率、胞浆小滴率间的差异均无统计学意义(P＞0.05)。A组的精子DFI较B组低，A组的精子存活率较B组高，其差异均具有统计学意义(P=0.00，P=0.00)。A组的精子AsAb阳性率较B组低，但两者间的差异无统计学意义(P＞0.05)。
5.两组精液细胞因子的比较：两组精液中IL-10的浓度均比IL-12的浓度高，其差异均具有统计学意义(P=0.00)。两组精液中的IL-10、IL-12浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。精液中的Mφ浓度与IL-10、IL-12的浓度间均无线性相关(R2=0.001、R2=0.000，P>0.05)。
6.两组精液ROS的比较：A组精液中的ROS浓度较B组低，其差异有统计学意义(P=0.00)。精液中Mφ的浓度与ROS的浓度呈线性相关(R2=0.65，P=0.00)。
7.Mφ浓度与精子质量参数的相关性分析：精液中的Mφ浓度与精子浓度、精子PR%、IM%、精子正常形态率、头部畸形率、颈部和中段畸形率、SDI、TZI、精子DFI、精子存活率等参数间均呈线性相关(P<0.05)。
结论：
1.本研究未发现精液中巨噬细胞发生明显的M1、M2分型；
2.精液中巨噬细胞的含量与精液体积和精子浓度间无显著相关，与精子的动力学、形态学、细胞膜完整性、DNA碎片率等精子质量参数间显著相关；
3.精液中巨噬细胞的含量与IL-10、IL-12的含量无显著相关；
4.精液中巨噬细胞的含量与ROS的含量显著相关。
巨噬细胞(Macrophages,Mφ)属于固有免疫细胞，其广泛存在于男性的精液中。在一般生理状态下，精液中的Mφ处于免疫抑制状态。当男性生殖系统出现病变时，精液中的Mφ会大量增加，其免疫功能被激活。本研究旨在分析精液中的Mφ浓度、活性、亚型，Mφ与精子的质量参数、活性氧类物质(Reactive oxygen species, ROS)、细胞因子(Cytokine, CK)间的相关性，为男性不育的病因分析提供实验数据。
方法：
1.收集2018-2019年就诊于我院生殖中心的男性精液标本共78份，采用巴氏染色法进行精液染色，观察精液中巨噬细胞的形态。
2.采用流式细胞术检测精液中Mφ及其主要亚型(M1、M2)的浓度。根据精液中Mφ的浓度将样本分为低浓度组(A组：Mφ<6×105/ml)和高浓度组(B组：Mφ>6×105/ml)。
3.分析两组患者的年龄、禁欲时间、体重指数(BMI)、原发性不育百分率等影响精液质量的相关因素间的差异。分析两组精液的体积、液化时间、粘稠度、PH值等相关理化参数间的差异。
4.采用手工法检测样本的精子动力学参数；采用巴氏染色法检测其精子形态学参数；采用染色质扩散(SCD)法检测其精子DNA碎片指数(DFI)；采用伊红苯胺黑染色法检测其精子细胞膜的完整性；采用混合凝集(MAR)法检测其精子细胞膜表面抗精子抗体(AsAb)的阳性率。分析两组样本的精子质量参数间的差异。
5.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测精液中的白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-12(IL-12)的浓度，分析两组间IL-10和IL-12浓度的差异及其Mφ的浓度与IL-10、IL-12浓度间的相关性。
6.采用全自动精浆生化免疫分析仪检测精液中ROS的浓度，分析两组间ROS浓度的差异及其Mφ的浓度与ROS浓度间的相关性。
7.分析精液中的Mφ浓度与精子质量参数间的相关性。
8.统计学方法：组间比较采用独立样本t检验和连续校正卡方检验，相关性分析采用Pearson分析。
结果：
1.精液中Mφ的检出情况：大部分精液中可检出少许在形态上与标准巨噬细胞株相似的圆形细胞。
2.Mφ的浓度分析：在78例精液Mφ浓度的检测中，Mφ<6×105/ml的样本(A组)共计34例，其浓度范围为0-5.30×105/ml，其均值为2.17±1.76×105/ml。Mφ>6×105/ml的样本(B组)共计44例，其浓度范围为6.10-15.50×105/ml，其均值为9.45±2.47×105/ml。两组精液中的Mφ均未分型。
3.患者情况及精液的理化指标：两组间的患者年龄、禁欲时间、BMI指数、原发性不育百分率、两组间的精液体积、液化时间、PH值、粘稠度等理化参数的差异均无统计学意义(P>0.05)。
4.两组精子质量相关参数比较：两组间的精子浓度和精子非前向运动百分率(NP%)的差异均无统计学意义(P＞0.05)。A组的精子前向运动百分率(PR%)较B组高、精子不活动率(IM%)较B组低，其差异均有统计学意义(P=0.00，P=0.00)。A组的精子正常形态率较B组高(P=0.00)；A组的精子头部畸形率、颈部和中段畸形率、精子畸形指数(SDI)、畸形精子指数(TZI)均较B组低，其差异均有统计学意义(P=0.00，P=0.01，P=0.00，P=0.01)；两组的精子主段畸形率、胞浆小滴率间的差异均无统计学意义(P＞0.05)。A组的精子DFI较B组低，A组的精子存活率较B组高，其差异均具有统计学意义(P=0.00，P=0.00)。A组的精子AsAb阳性率较B组低，但两者间的差异无统计学意义(P＞0.05)。
5.两组精液细胞因子的比较：两组精液中IL-10的浓度均比IL-12的浓度高，其差异均具有统计学意义(P=0.00)。两组精液中的IL-10、IL-12浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。精液中的Mφ浓度与IL-10、IL-12的浓度间均无线性相关(R2=0.001、R2=0.000，P>0.05)。
6.两组精液ROS的比较：A组精液中的ROS浓度较B组低，其差异有统计学意义(P=0.00)。精液中Mφ的浓度与ROS的浓度呈线性相关(R2=0.65，P=0.00)。
7.Mφ浓度与精子质量参数的相关性分析：精液中的Mφ浓度与精子浓度、精子PR%、IM%、精子正常形态率、头部畸形率、颈部和中段畸形率、SDI、TZI、精子DFI、精子存活率等参数间均呈线性相关(P<0.05)。
结论：
1.本研究未发现精液中巨噬细胞发生明显的M1、M2分型；
2.精液中巨噬细胞的含量与精液体积和精子浓度间无显著相关，与精子的动力学、形态学、细胞膜完整性、DNA碎片率等精子质量参数间显著相关；
3.精液中巨噬细胞的含量与IL-10、IL-12的含量无显著相关；
4.精液中巨噬细胞的含量与ROS的含量显著相关。