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传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus,IHHNV)也称为细角滨对虾浓核病毒(Penaeus stylirostris densovirus,PstDNV)或十足类浓核病毒(Decapod penstyldensovirus 1,PstDV1)。IHHNV宿主较为广泛,可感染细角滨对虾(Litopenaeus stylirostris)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和斑节对虾(Penaeus monodon)等重要水产养殖物种,给世界范围的对虾养殖行业造成了巨大经济损失,是世界动物卫生组织(The World Organisation for Animal Health,OIE)规定的须向其申报的甲壳动物重要病原。IHHNV于1981年首次发现于美国太平洋地区,2001年在我国首次报道,目前已在全国范围内广泛流行,是严重危害我国对虾养殖业的主要病毒之一。克氏原螯虾(Procambarus clarkii)又名小龙虾,是目前我国最重要的水产养殖物种之一。可感染克氏原螯虾的病原较多,其中危害最严重的病毒—白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)早在2004年就已获得证实,但有关IHHNV感染克氏原螯虾的研究却鲜有报道。本研究发现并首次报道了IHHNV可感染克氏原螯虾,证明了IHHNV的淡水传播可能;基于SYBR Green建立了一种特异性实时荧光定量PCR检测方法,分析比较了IHHNV在克氏原螯虾不同组织器官内的浓度差异;并通过高通量测序研究了克氏原螯虾感染IHHNV前后的转录组,分析了克氏原螯虾感染IHHNV前后的差异蛋白和差异基因。主要内容及结果如下:1.通过组织学和分子生物学方法证实克氏原螯虾在在自然和实验条件下均会被IHHNV感染。通过普通PCR检测野生样品发现,9只野生克氏原螯虾样品中有3只呈IHHNV阳性。在攻毒实验中,普通PCR检测结果发现实验组的20只克氏原螯虾全部为IHHNV阳性,且死亡率高达95%,远高于对照组;将克氏原螯虾鳃制成组织切片后显微观察发现,IHHNV阳性样品较IHHNV阴性样品能明显观察到异常肿大的细胞核。2.基于荧光染料SYBR Green建立了一种特异性检测IHHNV的实时荧光定量PCR方法。设计一对特异性引物IHHNV195F(5’GGGAGTTACCTTTGCTGC3’)和IHHNV195R(5’GGTCCGTCTACTGCGTCT 3’,GenBank:KM485613.1),可扩增产生195 bp的DNA片段。经检测发现该引物对IHHNV有高度特异性,不与对虾白斑综合征病毒(WSSV)、肝胰腺细小病毒(Hepatopancreatic parvo-like virus,HPV)、传染性肌肉坏死病毒(Infectious myonecrosis virus,IMNV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP),黄头病毒(Yellow-head virus,YHV)以及健康虾DNA出现交叉反应。本方法最低可检测1拷贝IHHNV质粒,可达到探针法荧光定量PCR的高灵敏度,同时具有染料法便捷、价廉的优点。3.利用建立的实时荧光定量PCR方法检测攻毒实验克氏原螯虾不同组织器官(鳃、肝胰脏、血淋巴以及肌肉)受IHHNV感染情况,发现鳃是IHHNV敏感器官。4.通过高通量测序转录组分析比较受IHHNV感染克氏原螯虾与健康克氏原螯虾间基因表达差异。分析比较后得到了237个差异表达基因,并利用荧光定量PCR方法验证了12条显著差异基因。KEGG通路富集结果显示,大量差异表达基因与克氏原螯虾摄食及代谢有关,免疫相关基因主要与重要的先天免疫手段--细胞凋亡有关。