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鸭病毒性肠炎(Duck viral enteritis, DVE)又名鸭瘟(Duck plague, DP),是由鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus, DEV)引起的鸭、鹅、天鹅及其它雁形目禽类的一种急性、热性、接触性的传染病,其特征是流行广泛、传播迅速、发病率和死亡率高。当前迫切需要建立可靠的检测手段,以便能正确地了解鸭群的健康状态和免疫抗体水平。本试验将DEV鸡胚化弱毒AV1222株通过鸡胚成纤维细胞增殖,细胞毒经反复冻融、差速离心收集病毒沉淀。将其等量分成三份,分别用蔗糖不连续密度梯度离心法、酒石酸钾不连续密度梯度离心法、氯化铯不连续密度梯度离心法三种纯化方法提纯。通过对三种纯化方法提纯的病毒进行电镜观察、浓度测定及ELISA抗原性检测,确定蔗糖不连续密度梯度离心法提纯的病毒纯度和浓度都高、ELISA抗原性好,是DEV较为理想的纯化方法。蔗糖密度梯度离心后的30%-40%、40%-50%、50%-60%三层收集的病毒经SDS-PAGE电泳,三层病毒条带清晰,Western-Blot检测结果表明:30%-40%、40%-50%层收集的病毒能够与DVE阳性血清发生特异性结合,确定以这两层病毒作为ELISA的包被抗原。以经蔗糖梯度纯化的DEV包被酶联板,建立了鸭病毒性肠炎间接ELISA诊断方法。通过方阵试验确定了包被抗原的浓度为3.64μg/ mL,血清稀释度为1:100;通过检测190份阴性血清确定了ELISA的判定标准,S/P≥0.125判为阳性,S/P<0.100判为阴性。阻断试验表明,细胞毒能在49.32%的程度上阻断与阳性血清的反应,对阴性血清没有明显影响。交叉试验表明:包被抗原与鸭其它7种疾病的阳性血清不发生交叉反应。本诊断方法与血清中和试验相比较,符合率为100%;与本实验室已经建立的DEV UL19重组蛋白间接ELISA诊断方法相比较,符合率为95.35%。批内变异系数为2.20%-8.40%,批间变异系数为1.61%-8.26%,均小于10%。上述结果表明本诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用本诊断方法对免疫鸭的特异性抗体水平进行了监测,免疫后第7天就已经产生抗DEV特异性抗体,28天抗体达到峰值;对免疫攻毒鸭抗体监测结果显示,抗体在攻毒后第2周时达到峰值,攻毒后第13周仍维持较高的抗体水平。对哈尔滨、齐齐哈尔、大庆送检的507份血清样品进行了检测,阳性检出率为35.1%,显示出良好的应用前景。本研究以提纯的鸭肠炎病毒作为包被抗原建立了间接ELISA诊断方法,本诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为开发商品化试剂盒、免疫鸭的抗体监测和DVE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。