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目的:探讨大黄素对百草枯(PQ)诱导的A549细胞损伤是否具有保护作用,并进一步探究其是否通过抑制细胞凋亡途径和由Nrf-2介导的抗氧化应激通路来拮抗百草枯中毒。 方法: (1)培养肺腺癌细胞系A549并建立PQ中毒的细胞模型,设立PQ组,大黄素干预组,及阴性对照组; (2)MTT法检测在不同处理条件下各组A549细胞存活率; (3)荧光显微镜及活性氧(ROS)检测试剂盒检测各组细胞内ROS总量; (4)线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测各组细胞线粒体膜电位的改变; (5)Annexin V/PI双标记法检测各组组中细胞凋亡的情况; (6)QPCR和Western-blot检测各组中Nrf2、HO-1、NQO1、P53、Bcl2、Bax mRNA及蛋白水平表达的变化情况; 结果: (1)MTT实验结果提示PQ浓度越高,对A549细胞毒性越大;低浓度大黄素对A549细胞活力没有明显影响;且能缓解PQ诱导A549产生的损伤作用。 (2)ROS检测显示提示:大黄素预处理A549细胞,能减少由PQ染毒所产生的大量ROS从而发挥保护作用。 (3)线粒体膜电位检测实验结果表明大黄素能稳定A549细胞膜电位,一定程度上减轻PQ致A549细胞膜电位下降而产生的一系列损伤作用。 (4)细胞凋亡率检测提示大黄素能减轻PQ引起的细胞凋亡; (5)Western Blot和QPCR结果提示:PQ诱导细胞内凋亡相关基因Bax、P53表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2表达水平;但大黄素能上调细胞内Bcl-2表达水平,抑制凋亡相关基因Bax,P53表达;同时刺激Nrf-2基因高表达以及下游的抗氧化损伤基因HO-1,NQO1基因的表达。 结论: (1)低浓度大黄素对百草枯诱导的A549细胞损伤能发挥保护作用; (2)大黄素能稳定线粒体膜电位,抑制PQ诱导的A549细胞凋亡; (3)大黄素可能通过Nrf2/H0-1通路抑制PQ刺激产生的氧化应激反应。