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乳腺增生是临床常见妇科疾病,主要症状见乳房疼痛、结节或肿块等。双金散结颗粒处方来源于全国名老中医临床经验方,由北柴胡、炒白芍、当归、郁金、鸡内金、浙贝母、蒲公英等12味中药组成,以“疏肝理气、活血通络、化痰散结”为治疗原则,对肝郁气滞、痰瘀互结型乳腺增生有良好的治疗效果。为将其制备成更适合临床应用的颗粒剂,本课题结合药效学研究筛选双金散结颗粒的提取工艺路线,进而对其制备工艺进行研究,同时通过网络药理学研究对双金结颗粒治疗乳腺增生的作用机制及物质基础进行预测,并结合超高效液相色谱-高分辨质谱联用技术（UHPLC-LTQ-Orbitrap MS）及乳腺增生SD大鼠药效实验对预测结果进行初步验证,以期为双金散结颗粒的中药新药研发及临床合理应用提供实验依据和参考。目的:以乳腺增生SD大鼠药效评价模型,筛选双金散结颗粒的提取工艺路线,进而优化提取、纯化以及成型工艺参数,确定其科学、合理的制备工艺。以网络药理学研究为基础结合UHPLC-LTQ-Orbitrap MS技术及乳腺增生SD大鼠药效实验初步探索双金散结颗粒治疗乳腺增生的物质基础及作用机制。方法:（1）双金散结颗粒制备工艺研究:外源性肌肉注射苯甲酸雌二醇及黄体酮注射液,构建乳腺增生大鼠模型,以乳腺组织腺泡增生情况为评价指标,筛选双金散结颗粒提取工艺路线。以芍药苷转移率为考察指标,采用正交试验设计法优化处方提取工艺参数,并确定纯化、浓缩、干燥等工艺参数;以颗粒成型率、溶化性等指标优选润湿剂浓度以及辅料种类、比例,确定最佳成型工艺。（2）双金散结颗粒网络药理学研究:利用BATMAN-TCM数据库收集双金散结颗粒中化学成分以及可能与其发生相互作用的靶标蛋白,在GeneCards数据库和OMIM数据库收集与乳腺增生相关的疾病靶点。使用R语言clusterProfiler包分别对乳腺增生相关靶点,君臣佐使的靶点进行DO富集分析,使用KOBAS网络服务器对双金散结颗粒治疗乳腺增生的直接靶点进行GO生物学过程和KEGG通路富集分析。（3）双金散结颗粒物质基础研究:利用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS技术检测双金散结颗粒主要化学成分,与网络药理学结果相结合初步探索其药效物质基础。（4）双金散结颗粒治疗大鼠乳腺增生药效机制验证:以网络药理学研究为基础,利用工艺筛选中药效试验的样本,以血清中雌二醇（E2）、孕酮（P）及催乳素（PRL）含量及乳腺组织中雌激素受体α（ERα）,雄激素受体（AR）,孕酮受体（PR）,肿瘤坏死因子-α受体（TNF-α）等蛋白表达为考察指标,对网络药理学预测结果进行验证。结果:（1）双金散结颗粒制备工艺研究:动物模型评价实验研究结果显示,乳腺增生大鼠给药治疗后,所有给药组乳腺组织异常增生情况减弱,以全方水提高剂量组药效作用略为突出,乳腺腺泡增生发生例数最少（3/8）,且乳腺腺泡变小或萎缩发生例数最多（4/8）,从而确定处方提取工艺路线为全方水提。药学研究优选出最佳提取工艺为全方药材水提3次,第1次加水12倍量、第2次加水9倍量、第3次加水9倍量,每次1h。随后采用分开浓缩的方式浓缩至相对密度1.1（60℃）,80℃真空干燥成干膏。将干膏粉与糊精按照1:1～1:1.25比例混合均匀,以90%乙醇为润湿剂,采用湿法制粒制备颗粒。（2）双金散结颗粒网络药理学研究:网络药理学研究收集处方相关化学成分213个,对应相关靶点697个,收集乳腺增生相关的蛋白靶点459个,其中包括50个直接治疗靶点。KEGG富集分析结果显示对乳腺增生发生、发展具有重要作用的富集结果共有20个。DO富集分析结果表明乳腺增生相关基因与双金散结颗粒君臣佐使药靶点共有DO条目,可聚类分为4类:内分泌失调相关疾病、异常增生相关疾病、气滞相关疾病、血瘀相关疾病;直接治疗靶点的GO生物学过程和KEGG通路分析结果表明,双金散结颗粒可能通过调节内分泌系统和体内的炎症反应来影响细胞的增殖和凋亡,并最终对乳腺增生产生治疗作用。（3）双金散结颗粒物质基础研究:本课题从双金散结颗粒中共鉴定出85个化学成分,其中16种为生物碱类化合物,15种为萜类化合物,7种为黄酮类化合物,9种为酚酸类化合物,3种香豆素类化合物,10种酯类及内酯类化合物,7种脂肪酸类化合物,4种氨基酸类化合物和14种其它类成分。正离子模式下检测出贝母素甲、乙,负离子模式下检测出柴胡皂苷a、d,以及芍药苷等成分。并推测贝母素甲、乙来自于浙贝母,柴胡皂苷a、d来自于柴胡,芍药苷来自于炒白芍,这些成分与双金散结颗粒疗效密切相关。（4）双金散结颗粒治疗乳腺增生药效机制验证:研究结果显示,与正常组比较,模型组大鼠血清E2显著升高（P＜0.01）;ERα,AR,PR,TNF-α蛋白表达增加;与模型组比较,治疗组大鼠血清E2显著下降（P＜0.01）;ERα,AR,PR,TNF-α蛋白表达显著降低（P＜0.01）。结论:本课题以药效学研究为基础筛选出双金散结颗粒提取工艺路线,进而优选出双金散结颗粒的提取、纯化以及成型工艺参数,确定的工艺合理、可行,为后续开发成中药新药奠定基础。网络药理学研究与UHPLC-LTQ-Orbitrap MS技术及乳腺增生SD大鼠药效实验相结合发现,双金散结颗粒治疗乳腺增生是多靶点、多通路共同作用的过程,其机制多与体内激素与炎症通路相关,并推测生物碱类及萜类成分可能与药效作用密切相关,可为双金散结颗粒的临床应用提供参考。