【摘 要】
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目的:探讨Slit2/Robo1在人宫颈癌组织中的表达及Robo1与临床病理的关系,并在体外过表达Robo1后研究其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:(1)收集于2013年12月至2019年12月广西壮族自治区人民医院妇科接受手术治疗的宫颈癌患者的宫颈癌组织,共70例,另取因子宫良性病变(如子宫肌瘤、子宫腺肌症等)切除子宫的20例正常宫颈组织作为对照组。运用实时荧光定量PCR(Quanti
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目的:探讨Slit2/Robo1在人宫颈癌组织中的表达及Robo1与临床病理的关系,并在体外过表达Robo1后研究其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:(1)收集于2013年12月至2019年12月广西壮族自治区人民医院妇科接受手术治疗的宫颈癌患者的宫颈癌组织,共70例,另取因子宫良性病变(如子宫肌瘤、子宫腺肌症等)切除子宫的20例正常宫颈组织作为对照组。运用实时荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR)技术检测宫颈组织中Slit2/Robo1 m RNA的表达情况,并分析Robo1的表达与宫颈癌患者的临床病理参数的关系;(2)运用慢病毒载体技术,构建带有嘌呤霉素(Puromycin)抗性基因和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的过表达Robo1慢病毒载体,并将嘌呤霉素用于筛选出稳定过表达Robo1的宫颈癌Si Ha、He La细胞稳定株;(3)克隆形成实验和cck-8实验用于检测宫颈癌细胞的增殖情况;划痕实验及Transwell细胞迁移实验用于检测宫颈癌细胞的迁移能力;Transwell细胞侵袭实验用于检测宫颈癌细胞的侵袭能力。结果:(1)Robo1 m RNA在20例正常宫颈组织样本中的相对表达量比70例宫颈癌组织样本高(P<0.05)。Robo1 m RNA的低表达与肿瘤的低分化(P<0.05)、晚FIGO分期(P<0.05)、淋巴结转移有关(P<0.05);(2)筛选出过表达Robo1的宫颈癌Si Ha、He La细胞稳定株。CCK-8和克隆形成实验表明,Si Ha、He La细胞过表达组(OE,Over-expression)中的细胞增殖能力低于NC组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组与对照组相比Robo1抑制Hela、Si Ha细胞生长作用均在第5天最明显(P值分别为0.0004和0.002)。划痕实验和Transwell迁移实验表明,He La和Si Ha细胞OE组中的细胞划痕愈合率低于NC组(P<0.05)。He La和Si Ha细胞OE组穿出基底膜的细胞数小于NC组(P<0.05)。Transwell侵袭实验表明,He La和Si Ha细胞OE组穿出基质胶膜的细胞数小于NC组(P<0.05)。结论:(1)Slit2/Robo1在宫颈癌组织中呈低表达;(2)观察癌组织中Robo1 m RNA的表达有助于判断宫颈癌分化程度、FIGO分期、淋巴转移;(3)Robo1能抑制宫颈癌的增殖、迁移和侵袭能力,它可能作为抑癌基因参与宫颈癌的发生发展。
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