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在不同配型的单倍体AS7和AS21中，利用LHF-PCR(Long homology flanking-PCR)将醛糖还原酶基因gre3缺失，并引入栖瘤胃真菌Piromyces sp. E2的木糖异构酶基因（xylA）和树干毕赤酵母（Pichia stipits）的木酮糖激酶(xks1)，杂交融合成双倍体，探究其利用木糖生长发酵、乙醇和木糖醇生成情况。 以载体pGAPZαA为骨架，切去GAP启动子、α-信号肽基因以及AOX终止子、TEF1启动子；将gre3的启动子和终止子引入载体，构建出 gre3基因敲除骨架载体pGREZ。以pGREZ载体为骨架，将 xks1克隆入载体 pGREZ，构建出单基因置换型表达载体pGREZ-xks1，再引入xylA，构建出双基因共表达pGREZ-xylA-xks1。利用电转化法将载体pGREZ-xylA-xks1转入单倍体菌株AS7菌株和AS21菌株，杂交融合成二倍体，获得gre3缺失、表达xylA、xks1的单倍体和二倍体。 缺失gre3基因的单倍体AS7-KA、AS21-KA和二倍体AS7-KA/AS21-KA以及原始菌AS2.489等利用木糖生长、发酵实验，结果①重组菌能在木糖为唯一碳源生长，原始菌株AS2.489基本不长，重组菌木糖利用速率较快②相比原始菌AS2.489，单倍体AS7-KA、AS21-KA和二倍体 AS7-KA/AS21-KA利用木糖效率更高，木糖转化率也提高，副产物木糖醇产率降低，有少量乙醇生成。 利用甲基磺酸乙酯（EMS）对重组酵母进行诱变处理，并在依次在有氧、限氧条件下，利用YPX培养基进行适应性进化、筛选，获得单倍体AS7-KAEAE、AS21-KAEAE和二倍体AS7-KA/AS21-KAEAE，其木糖利用率进一步提高、木糖醇产率进一步降低，乙醇生成增加。